慢性低氧高二氧化碳對腺苷A-,2A-受體基因敲除小鼠骨骼肌形態(tài)及TNF-α、PPARδ的影響.pdf

1、目的： (1)觀察慢性低氧高二氧化碳對腺苷A2A受體基因敲除小鼠骨骼肌形態(tài)學(xué)改變；(2)觀察慢性低氧高二氧化碳對腺苷A2A受體基因敲除小鼠股外側(cè)肌TNF-α、PPARδ mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。 方法： SPF級腺苷A2A受體基因敲除小鼠及其同胞的野生型小鼠32只，雌雄各半，體重20～25g，隨機(jī)分為4組：野生型對照組(WTNC組，n=8)，野生型低氧高二氧化碳組(WTHH組，n=8)，腺苷A2A受體基因敲除

2、對照組(KONC組，n=8)，腺苷A2A受體基因敲除低氧高二氧化碳組(KOHH組，n=8)。將WTHH組和KOHH組小鼠置于常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi)，通入氮氣(N2)調(diào)節(jié)艙內(nèi)氧濃度維持在9％～11％，輸入二氧化碳(CO2)使其艙內(nèi)濃度維持在5％～6％，每天8小時，每周6天。WTNC組和KONC組小鼠除吸入空氣外，其余條件同實驗組。所有小鼠于實驗開始和結(jié)束時各稱取體重一次。4周后，小鼠用1％水合氯醛腹腔注射麻醉后處死，取小鼠右側(cè)后肢股外側(cè)肌

3、，在光鏡下觀察肌肉顯微結(jié)構(gòu)改變、透射電鏡下觀察肌肉超微結(jié)構(gòu)變化，Real-time PCR法檢測肌肉TNF-α、PPARδ mRNA的表達(dá)水平、Western-blot法檢測肌肉TNF-α、PPARδ蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： (1)與對照組相比，WTHH和KOHH小鼠體重增長減慢(p<0.01)，光鏡下：骨骼肌纖維萎縮，肌纖維間炎性細(xì)胞浸潤，間質(zhì)內(nèi)脂肪沉積；電鏡下：線粒體數(shù)目增多，內(nèi)部結(jié)構(gòu)明顯破壞，KOHH組小鼠骨骼肌損

4、害較WTHH組更明顯。 (2)Real-time PCR法檢測肌肉TNF-α、PPARδ mRNA發(fā)現(xiàn)：WTNC和KONC小鼠股外側(cè)肌TNF-α及PPARδ mRNA表達(dá)均無顯著差異(p>0.05)，WTHH、KOHH小鼠股外側(cè)肌TNF-α mRNA較對照組顯著升高(p<0.01)，WTHH、KOHH小鼠股外側(cè)肌PPARδmRNA較對照組顯著降低(p<0.01)。WTHH和KOHH兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，KOHH組小鼠TNF-

5、α mRNA表達(dá)高于WTHH組小鼠(p<0.01)。 (3)Western-blot法檢測肌肉TNF-α、PPARδ蛋白發(fā)現(xiàn)與各自mRNA表達(dá)趨勢相同，WTHH和KOHH組小鼠股外側(cè)肌TNF-α蛋白表達(dá)水平(3.41±0.23 vs4.06±0.07)均較對照組(2.59±0.27 vs2.67±0.16)高，WTHH和KOHH組小鼠股外側(cè)肌PPARδ蛋白表達(dá)水平(0.64±0.03 vs0.32±0.02)均較對照組(1.3±

6、0.02 vs1.2±0.06)低(p<0.01)。 結(jié)論： (1)慢性低氧高二氧化碳可導(dǎo)致小鼠骨骼肌纖維萎縮，炎癥細(xì)胞浸潤，線粒體結(jié)構(gòu)破壞。 (2)慢性低氧高二氧化碳促使小鼠股外側(cè)肌TNF-α升高，PPARδ降低，TNF-α可能與COPD骨骼肌結(jié)構(gòu)或功能的破壞密切相關(guān)，PPARδ也可能參與其中。 (3)腺苷A2A受體基因敲除小鼠在慢性低氧高二氧化碳條件下肌纖維損害更加明顯，TNF-α升高更加顯著，腺苷A