水紅花子品質(zhì)相關(guān)因素及其他藥用部位開(kāi)發(fā)研究.pdf

1、目的：
　　 本論文是國(guó)家自然基金項(xiàng)目“水紅花子炮制前后功用的改變與物質(zhì)基礎(chǔ)變化相關(guān)性研究（項(xiàng)目編號(hào)：30873437）”課題的部分內(nèi)容。水紅花子為蓼科植物紅蓼Polygonumorientale L.的干燥成熟果實(shí)，性寒、味咸，歸肝、胃經(jīng)；具有散血消癥，消積止痛功能，主治癥瘕痞塊、癭瘤腫痛、食積不消，胃脘脹痛等癥?，F(xiàn)代藥理研究表明，本品具有抗腫瘤作用，對(duì)原發(fā)性肝癌有較好療效。本研究?jī)?nèi)容主要包括：水紅花子正丁醇部分化學(xué)成分研究、

2、LC/MS分析水紅花子化學(xué)成分、水紅花子品質(zhì)相關(guān)因素分析、水紅花子其他藥用部位的開(kāi)發(fā)研究及水紅花子劑型工藝研究。
　　 通過(guò)對(duì)正丁醇部分化學(xué)成分研究，進(jìn)一步完善了水紅花子化學(xué)成分的研究?jī)?nèi)容，并建立了LC/MS分析水紅花子化學(xué)成分的新方法。通過(guò)對(duì)水紅花子炮制前后化學(xué)成分的變化，來(lái)探討炮制原理。通過(guò)考察不同儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)藥材質(zhì)量的影響，為水紅花子臨床應(yīng)用的質(zhì)量保證提供科學(xué)依據(jù)。通過(guò)對(duì)水紅花子不同藥用部位化學(xué)成分的比較及體外活性研究，為本

3、品的資源開(kāi)發(fā)提供了科學(xué)參考。
　　 材料與方法：
　　 材料：
　　 1、藥材：（1）含量測(cè)定所用藥材購(gòu)于各藥材市場(chǎng)，詳見(jiàn)各章。（2）其它藥材均自采于大連南關(guān)嶺，經(jīng)本校翟延君教授鑒定為蓼科植物紅蓼Polygonum orientale L.的干燥成熟果實(shí)。
　　 2、對(duì)照品：實(shí)驗(yàn)室自制或購(gòu)買。
　　 方法：
　　 1.水紅花子正丁醇部分化學(xué)成分研究：柱層析、重結(jié)晶、薄層分析、制備液相等方法

4、分離，并結(jié)合光譜解析鑒定化合物結(jié)構(gòu)。
　　 2.LC/MS分析水紅花子化學(xué)成分：通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外大量相關(guān)文獻(xiàn)，收集水紅花子中分離得到的化合物數(shù)據(jù)，利用LC/MS中得到波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中收集得到數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析判斷出水紅花子中含有的化學(xué)成分。
　　 3.水紅花子品質(zhì)相關(guān)因素分析：通過(guò)高效液相色譜法分析得到的色譜圖，分析水紅花子炮制前后化學(xué)成分的變化、儲(chǔ)藏節(jié)律、N-p-香豆酰酪胺的含量測(cè)定。
　　 4.水紅花子其他藥用部

5、位開(kāi)發(fā)研究：通過(guò)MTI還原法對(duì)水紅花子的根、莖、葉進(jìn)行了抗癌活性的藥理分析，并用高效液相色譜法測(cè)定了指標(biāo)性成分的含量。
　　 5.水紅花子劑型工藝研究：通過(guò)文獻(xiàn)收集，運(yùn)用傳統(tǒng)用藥理論篩選出合理有效藥物，配伍成新的抗癌復(fù)方。通過(guò)正交試驗(yàn)，考察并建立最佳提取工藝與劑型。
　　 結(jié)果：
　　 1.水紅花子正丁醇部分化學(xué)成分研究：從正丁醇部分共分離出8個(gè)化合物，分別為：β-谷甾醇、正十六烷酸、3，3'-二甲氧基靴花酸、槲

6、皮素、胡蘿卜苷、對(duì)羥基-香豆酸.對(duì)羥基-苯乙醇脂、花旗松素、N-p-香豆酰酪胺。
　　 2.LC/MS分析水紅花子化學(xué)成分：利用LC/MS與文獻(xiàn)對(duì)照分析出8個(gè)化合物，分別為：3,5，7-三羥基色原酮、花旗松素、N-p-香豆酰酪胺、槲皮素、正十六烷酸、對(duì)羥基-香豆酸-對(duì)羥基-苯乙醇脂、紅草素、異紅草素。
　　 3.水紅花子品質(zhì)相關(guān)因素分析：水紅花子炮制后槲皮素的含量明顯增加；花旗松素在同樣的炮制條件加熱，結(jié)果產(chǎn)生多個(gè)副產(chǎn)物

7、，槲皮素是其中之一，且含量比炮制前含量增加。通過(guò)對(duì)儲(chǔ)藏時(shí)間節(jié)律的考察結(jié)果表明：化學(xué)成分N-p-香豆酰酪胺隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的增加而緩慢減少，另有未知性成分也緩慢減少，花旗松素、槲皮素含量并未發(fā)生明顯的變化，故水紅花子的儲(chǔ)藏時(shí)間3年內(nèi)對(duì)其品質(zhì)無(wú)相關(guān)。含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)
　　 結(jié)果:10個(gè)商品藥材水紅花子中N-p-香豆酰酪胺含量差異明顯，最高為0.032％，最低為0.005％，平均含量為0.020％，其中5個(gè)商品藥材的含量在0.020％以上，僅

8、一個(gè)商品藥材含量為0.005％。
　　 4.水紅花子其他藥用部位開(kāi)發(fā)研究：通過(guò)對(duì)根、莖、葉3個(gè)不同部位花旗松素、槲皮素及N-p-香豆酰酪胺化學(xué)成分的比較：僅葉中含有花旗松素。體外藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，根、莖、葉粗提物對(duì)HtLa、MCF-7、A375-S2和HepG2細(xì)胞增殖均有不同程度的抑制作用；對(duì)HtepG2的IC50為根>莖>葉，對(duì)A375-S2的IC50為根>莖>葉，對(duì)MCF-7的IC50為根>莖>葉，對(duì)HeLa的IC50為莖

9、>根>葉。
　　 5.水紅花子劑型工藝研究：通過(guò)文獻(xiàn)參考結(jié)合傳統(tǒng)用藥理論篩選出最佳藥物配伍制成復(fù)方，利用正交試驗(yàn)確定復(fù)方最佳提取工藝為水煎煮3次，加水量分別為12、10、10倍，煎煮時(shí)間1小時(shí)。根據(jù)實(shí)際用藥將復(fù)方做成片劑和膠囊方便服用。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過(guò)柱層析，液相等方法從水紅花子正丁醇部分分離得到8個(gè)化合物，經(jīng)液相、薄層、光譜解析鑒其結(jié)構(gòu)，證明實(shí)驗(yàn)方法有效可行。運(yùn)用所分得的化合物進(jìn)行活性篩選及含量測(cè)

10、定研究。
　　 2.首次運(yùn)用LC/MS與文獻(xiàn)對(duì)照分析水紅花子化學(xué)成分，得到8個(gè)化合物，證明實(shí)驗(yàn)方法有效可行。由于目前LC/MS數(shù)據(jù)庫(kù)還不完善，本研究深度還有待繼續(xù)。
　　 3.通過(guò)對(duì)水紅花子炮制前后化學(xué)成分變化的考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)炮制后槲皮素的含量明顯增加，為釋析水紅花子的炮制原理提供一定的科學(xué)參考。通過(guò)對(duì)儲(chǔ)藏時(shí)間節(jié)律的考察，結(jié)果表明水紅花子在儲(chǔ)藏時(shí)間3年內(nèi)對(duì)其品質(zhì)無(wú)明顯影響，為臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)，首次為水紅花子的保存