江蘇產(chǎn)菊非藥用部位資源化學(xué)研究.pdf

1、菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序，是中醫(yī)臨床上常用的中草藥，具有疏風(fēng)、清熱、明目、解毒的功效，用于風(fēng)熱感冒，頭痛眩暈，目赤腫痛，眼目昏花，瘡癰腫毒等癥。我國(guó)已有300多年的栽培史。本論文選擇藥用植物菊為研究對(duì)象，開展藥材生產(chǎn)過(guò)程非藥用部位的資源性化學(xué)成分及其資源化利用研究。對(duì)菊科不同品種菊的不同組織器官（包括非藥用部位根、莖、葉及藥用部位花序）進(jìn)行資源化學(xué)評(píng)價(jià)，并對(duì)其非藥用部位

2、中不同類型資源性化學(xué)成分進(jìn)行提取分離、不同化學(xué)部位的生物活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為菊非藥用部位的資源綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論簡(jiǎn)述如下:
　　1.江蘇產(chǎn)菊不同組織器官資源化學(xué)評(píng)價(jià)
　　分別采用超高效液相-二極管陣列檢測(cè)器(UPLC-DAD)、紫外可見分光光度法(UV)，超高效液相-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC-TQ/MS)測(cè)定不同生長(zhǎng)期菊不同組織器官（根、莖、葉、花）及不同品種中黃酮類、有機(jī)酸類、多糖類、核苷類及氨

3、基酸類成分的量，評(píng)價(jià)其化學(xué)成分分布、動(dòng)態(tài)積累規(guī)律及不同品種差異。
　　(1)化學(xué)成分分布
　　對(duì)各類型資源性化學(xué)成分在江蘇產(chǎn)大白菊植物不同組織器官中的分布規(guī)律進(jìn)行評(píng)價(jià):黃酮類成分分析結(jié)果表明，總黃酮類成分的量分布順序?yàn)?葉＞花＞根＞莖，其中，不同生長(zhǎng)期中，葉片所含黃酮類成分量為9.94％～18.66％，花中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.90％～12.10％,根中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.88％～8.02％，莖中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.98％～5.41％;有機(jī)酸類

4、成分分析表明，不同生長(zhǎng)期中，總有機(jī)酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分布順序?yàn)?葉≈花＞根＞莖，葉中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.44％～4.94％，花中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.13～3.79％，根中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.89％～2.64％，莖中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.20％～1.48％;多糖類成分分析結(jié)果表明，不同生長(zhǎng)期中，總多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分布順序?yàn)?莖≈根＞花＞葉，莖和根中多糖類含量很高，分別為21.21％～35.92％和26.07％～38.09％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于花和葉（7.74％～8.57％和4.25

5、％～6.99％）;核苷類成分分析結(jié)果表明，菊葉中檢測(cè)到4種核苷，莖和根中分別檢測(cè)到2種核苷，花中檢測(cè)到7種核苷，總核苷的量分布順序?yàn)?花＞葉＞根＞莖;氨基酸類成分分析結(jié)果表明，菊的根、莖、葉中分別檢測(cè)到13種氨基酸，花中檢測(cè)到16種氨基酸，總氨基酸的量分布順序?yàn)?花＞根＞葉＞莖。
　　可見，葉是菊非藥用部位中黃酮類和有機(jī)酸類成分含量最高的部位，且都略高于花;莖和根是多糖類成分中含量最高部位，遠(yuǎn)高于葉和花;葉和根分別是菊非藥用部位中

6、核苷類和氨基酸類成分含量最高部位，但都低于花。
　　(2)成分動(dòng)態(tài)積累
　　對(duì)各類型資源性化學(xué)成分在江蘇產(chǎn)大白菊植物不同組織器官中的動(dòng)態(tài)積累評(píng)價(jià)結(jié)果表明:不同生長(zhǎng)期菊根、莖、葉中黃酮類、有機(jī)酸類和多糖類成分量發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，其中，黃酮類成分除根中11月中旬含量達(dá)到最高(8.02％)外，葉、莖和花均在11月初含量最高，分別為18.66％，5.41％和12.10％;有機(jī)酸類成分在葉和花中均于11月初含量達(dá)到最高，分別為4.94％和

7、3.79％，莖和根均于11月中旬含量最高，分別為1.49％和2.63％;多糖類成分除莖中在10月底含量最高(35.92％)外，葉、根和花部位均在11月初含量達(dá)到最高，分別為6.99％，38.09％和8.62％;核苷類和氨基酸類成分含量也隨生長(zhǎng)期變化，但無(wú)明顯規(guī)律?？梢?，菊根、莖、葉及花中各類型化學(xué)成分的總體趨勢(shì)為11月中上旬含量達(dá)到高峰，此期間菊花已盛開，是花序的最佳采收期。菊花采摘后的根、莖、葉中各類型化學(xué)成分量積累達(dá)到峰值，因此，采

8、摘花序后為菊非藥用部位的資源豐產(chǎn)期。也是菊非藥用部位的最佳利用期。
　　(3)不同品種差異
　　比較了江蘇省射陽(yáng)縣洋馬鎮(zhèn)三個(gè)不同品種菊（紅心菊，黃菊花，祁菊）根、莖、葉、花中黃酮類、多糖類、核苷類及氨基酸類成分的量。黃酮類成分分析結(jié)果表明，花中黃酮總量最高的為祁菊，根、莖、葉中量最高的均為黃菊花;多糖類成分分析結(jié)果表明，葉、根和花中量最高的均為祁菊，莖中黃菊花多糖含量明顯高于其他品種，達(dá)32.37％;核苷類成分分析結(jié)果表明，

9、葉和花中核苷總量最高的為紅心菊，莖和根中含量最高的均為祁菊;氨基酸類成分分析結(jié)果表明，葉和根中氨基酸總量最高的均為紅心菊，莖和根中總量最高的為祁菊。說(shuō)明菊不同品種不同部位間各成分有很大差異，需要對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，針對(duì)其含量特點(diǎn)加以合理開發(fā)利用。
　　根據(jù)資源化學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果，在對(duì)菊非藥用部位中黃酮及有機(jī)酸類成分進(jìn)行利用時(shí)，可優(yōu)先選用葉部位，且可選用射陽(yáng)品種中的黃菊花;利用多糖時(shí)建議選擇莖和根部位，莖可選擇射陽(yáng)品種中的黃菊花，根選擇祁菊

10、;對(duì)核苷和氨基酸類成分的利用分別選用葉和根部位，且在射陽(yáng)品種中均優(yōu)先選擇紅心菊。利用的最佳時(shí)期可選擇花序采收期，此時(shí)菊非藥用部位成分總體含量為最高。該研究結(jié)果為菊花采收后廢棄非藥用組織器官的資源化利用提供了有益借鑒。
　　2.紅心菊非藥用部位成分的生物活性評(píng)價(jià)
　　首先用水對(duì)紅心菊非藥用部位根、莖、葉進(jìn)行了提取，得到水提物，水提后藥渣再用95％工業(yè)乙醇提取，得到醇提物。將水提物醇沉后除蛋白，得到總多糖部位;醇沉上清液濃縮后與

11、醇提物合并，先用石油醚萃取，得到石油醚部位，萃余液濃縮后上聚酰胺柱分別用水和70％乙醇洗脫得到水洗脫部位和70％乙醇洗脫部位，再分別用大孔樹脂柱和聚酰胺柱對(duì)水洗脫部位和70％乙醇洗脫部位進(jìn)行純化，分別得到有機(jī)酸部位和黃酮部位。對(duì)分離得到的除石油醚部位外的3個(gè)部位進(jìn)行含量測(cè)定，各部位含量分別為:黃酮部位52.39％，有機(jī)酸部位44.12％，多糖部位64.41％。將總多糖部位采用超濾技術(shù)分為5個(gè)不同分子量組分，包括多糖1(＞10W)，多糖2

12、(3W～10W)，多糖3(1W～3W)，多糖4(3000～1W)，多糖5(＜3000)。并對(duì)各組分進(jìn)行含量測(cè)定，按分子量從高到底的各組分含量分別為83.85％,56.16％,51.27％，57.56％和42.85％。本試驗(yàn)為后期生物活性評(píng)價(jià)提供樣品支持。
　　對(duì)以上分離得到的4個(gè)不同活性部位（黃酮部位，有機(jī)酸部位，多糖部位和石油醚部位）及多糖5個(gè)不同組分進(jìn)行了生物活性評(píng)價(jià)?？寡趸ㄟ^(guò)DPPH，F(xiàn)RAP，ABTS實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，各組

13、分均表現(xiàn)出不同程度的抗氧化作用，其中，黃酮和有機(jī)酸部位抗氧化活性最為顯著，其次為多糖部位，石油醚部位抗氧化能力較弱，多糖不同組分中多糖1，多糖2，多糖3的抗氧化能力相對(duì)較強(qiáng)，其次為多糖4，多糖5最弱;通過(guò)家兔血漿體外PT，TT，APTT測(cè)定，評(píng)估抗凝血活性，結(jié)果表明，有機(jī)酸和多糖類成分均具有明顯的抗凝血活性;通過(guò)MTT法測(cè)定對(duì)人乳腺癌腫瘤細(xì)胞MCF-7生長(zhǎng)的抑制作用，結(jié)果表明，多糖不同組分中，多糖2，即分子量范圍在3W～10W的多糖表現(xiàn)

14、出明顯的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，濃度最高為1 mg/mL時(shí)，抑制率可達(dá)56.39％;采用H2O2致神經(jīng)細(xì)胞PC12氧化損傷模型，對(duì)菊非藥用部位活性成分的神經(jīng)保護(hù)作用進(jìn)行了初步篩選，結(jié)果表明，菊非藥用部位中的有機(jī)酸類成分及多糖小分子量組分(＜3000)對(duì)H2O2引起的PC12細(xì)胞損傷均具有一定的保護(hù)作用;采用選擇性培養(yǎng)基結(jié)合光比濁法的腸道微生物定向培養(yǎng)評(píng)價(jià)對(duì)腸道菌生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，黃酮部位對(duì)病原菌腸球菌和腸桿菌有生長(zhǎng)抑制作用，且會(huì)隨著濃

15、度的升高而增強(qiáng)，多糖部位對(duì)病原菌腸球菌和腸桿菌有生長(zhǎng)抑制作用，對(duì)有益菌雙歧桿菌和乳酸桿菌有生長(zhǎng)促進(jìn)的作用，且均隨著濃度的升高而增強(qiáng);采用DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型評(píng)價(jià)菊非藥用部位多糖對(duì)小鼠結(jié)腸炎的保護(hù)作用，結(jié)果表明，多糖部位可有效降低急性腸炎模型小鼠的死亡率，緩解慢性腸炎模型小鼠體重降低，改善模型小鼠腹瀉、便血等癥狀，說(shuō)明多糖部位可有效緩解結(jié)腸炎小鼠炎癥反應(yīng)，減輕結(jié)腸損傷。本研究說(shuō)明菊非藥用部位根莖葉中的各類成分均具有一定的生物活性，本研