水紅花子對(duì)流產(chǎn)模型小鼠子宮肥大細(xì)胞和TNF-α的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究水紅花子對(duì)細(xì)菌脂多糖(LPS)和米非司酮(RU486)誘發(fā)流產(chǎn)小鼠子宮肥大細(xì)胞(MC)和腫瘤壞死因子(TNF-α)的影響，初步探討水紅花子保胎作用機(jī)理，為臨床中藥免疫療法治療流產(chǎn)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：昆明種小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(A1，A2)和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組又分為細(xì)菌脂多糖(LPS)流產(chǎn)模型組(B1)、米非司酮(RU486)流產(chǎn)模型組(B2)、中藥單處理組(C1，E1，C2，E2)、中藥LPS雙處理組(D1

2、，F(xiàn)1)、中藥RU486雙處理組(D2，F(xiàn)2)，共12組別。A1、A2、B1、B2均為孕2d開(kāi)始灌DW，連續(xù)灌至8d，其中在孕6d：A1腹腔注射PBS(3μl/g)(下同)，A2背部皮下注射含少許乙醇的DDW(250μl)(下同)，B1腹腔注射LPS(3μl/g)(下同)，B2背部皮下注射RU486(250μl)(下同)；C1、C2、D1、D2均為孕2d開(kāi)始灌水紅花子水煎劑，連續(xù)灌至孕8d，其中在孕6d:C1腹腔注射PBS，C2皮下注射

3、含少許乙醇的DDW，D1腹腔注射LPS，D2皮下注射RU486。實(shí)驗(yàn)中特別選擇了傳統(tǒng)保胎中藥黃芩白術(shù)配伍E1、E2、F1、F2為水紅花子各相應(yīng)組別陽(yáng)性藥物對(duì)照。各組均與孕8d剖開(kāi)腹腔觀察子宮和胚胎生長(zhǎng)狀況，記錄胚胎著床數(shù)和發(fā)生流產(chǎn)情況，比較LPS、RU486引起小鼠的流產(chǎn)效果；取子宮，通過(guò)HE染色觀察組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化，甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)處理小鼠子宮肥大細(xì)胞的分布和數(shù)量，及制成子宮組織勻漿，用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)檢測(cè)子宮組織

4、TNF-α的含量變化。
　　 結(jié)果：(1)LPS流產(chǎn)模型：①平均胚胎數(shù)比較：與A1相比，B1平均胚胎數(shù)極顯著減少(P＜0.01)；中藥處理組及中藥LPS雙處理組小鼠子宮胚胎數(shù)趨近與正常對(duì)照A1組，差異不顯著。其中C1組即水紅花子單處理平均胚胎數(shù)最多；②流產(chǎn)率比較：A1組自然流產(chǎn)率為20％;LPS注射使B1組小鼠流產(chǎn)率達(dá)到70％;D1、F1組流產(chǎn)率分別降到15％和33％;C1、E1的流產(chǎn)率均為0。(2)RU486流產(chǎn)模型：①平均胚

5、胎數(shù)比較：B2組與其他各組相比，平均胚胎數(shù)均極顯著減少(P＜0.01)；水紅花子處理C2、D2組均比對(duì)照A2組平均胚胎數(shù)顯著增加(P＜0.05)，其中水紅花子處理C2組平均胚胎數(shù)目最多。②流產(chǎn)率比較：A2組流產(chǎn)率達(dá)到25％;RU486處理B2組流產(chǎn)率為80％;D2、E2和F2組流產(chǎn)率分別為30％、20％和50％，其中C2組小鼠流產(chǎn)率最低為10％。(3)水紅花子對(duì)流產(chǎn)模型小鼠子宮肥大細(xì)胞的影響：各組小鼠子宮肥大細(xì)胞存在嚴(yán)重的脫顆?，F(xiàn)象，主

6、要分布于子宮肌層、肌間血管層、外膜以及系膜三角區(qū)。LPS處理B1組與對(duì)照A1組相比，肥大細(xì)胞數(shù)目顯著減少(P＜0.05)；RU486處理B2組與對(duì)照A2組相比，肥大細(xì)胞數(shù)目極顯著減少(P＜0.01)；水紅花子單處理即C1、C2組肥大細(xì)胞數(shù)目最多，且C1與對(duì)照A1組相比有顯著性的差異(P＜0.05)；而黃芩白術(shù)單處理組E1、E2在各實(shí)驗(yàn)組中肥大細(xì)胞數(shù)目均為最低水平；其他各組肥大細(xì)胞數(shù)目分布不一，并且出現(xiàn)了不同程度的差異性。(4)水紅花子對(duì)

7、流產(chǎn)模型小鼠子宮TNF-α細(xì)胞因子含量的影響：流產(chǎn)模型B1、B2組小鼠子宮組織中的TNF-α含量極顯著都高于其他各組(P＜0.01)；水紅花子處理組C1與D1相比，TNF-α含量無(wú)顯著差異，黃芩白術(shù)處理組E1、F1中TNF-α含量最少。C2、D2、F2與對(duì)照組A2相比，含量都有所增加，但并無(wú)顯著差異，E2組TNF-α含量最少。
　　 結(jié)論：(1)水紅花子與傳統(tǒng)保胎中藥黃芩白術(shù)在對(duì)抗LPS、RU486誘導(dǎo)小鼠流產(chǎn)中有著相同的功效。

8、在受孕第2～8d使用中藥預(yù)防，水紅花子對(duì)抗LPS、RU486的流產(chǎn)作用效果顯著，平均胚胎數(shù)與流產(chǎn)率趨近正常水平。(2)水紅花子通過(guò)調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞的數(shù)量分布及其釋放某些活性物質(zhì)，拮抗LPS誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，抑制RU486對(duì)孕酮的拮抗作用，維持子宮局部免疫水平，向有利于正常妊娠的優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)變。(3)水紅花子抑制由LPS、RU486誘導(dǎo)的TNF-α過(guò)度分泌，阻止Th1型細(xì)胞因子對(duì)胚胎的免疫排斥，維持Th1/Th2平衡。在對(duì)抗LPS、RU4