PP242增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞株的化療敏感性及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分PP242增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞株的化療敏感性及其機(jī)制研究
　　【目的】研究哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制劑III—PP242聯(lián)合應(yīng)用泰素對人卵巢癌細(xì)胞株A2780和SKOV3的影響,并初步探討其內(nèi)在分子機(jī)制。
　　【方法】不同濃度的泰素處理A2780和SKOV3細(xì)胞,四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測細(xì)胞增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測其凋亡情況;蛋白免疫印跡法分析mTOR抑制劑PP242處理A2780和SKOV3細(xì)胞后

2、mTOR及其下游分子的表達(dá)情況;PP242聯(lián)合泰素處理A2780和SKOV3細(xì)胞,流式細(xì)胞儀和Hoechst33342染色檢測細(xì)胞凋亡;免疫熒光染色觀察細(xì)胞漿微管結(jié)構(gòu)的變化。
　　【結(jié)果】隨泰素濃度的升高和時(shí)間的延長,A2780和SKOV3細(xì)胞的凋亡率逐漸升高,但兩種細(xì)胞在24h時(shí)隨泰素濃度的升高而凋亡率變化不明顯,SKOV3細(xì)胞在48h和72h時(shí)凋亡率變化不明顯。PP242作用24h后A2780和SKOV3細(xì)胞的磷酸化mTOR、

3、磷酸化S6K1及Survivin蛋白表達(dá)下降。PP242聯(lián)合泰素處理細(xì)胞凋亡率明顯增加,以48h作用最明顯。Hoechst33342染色顯示細(xì)胞核固縮、碎裂明顯,免疫熒光染色示胞質(zhì)內(nèi)微管蛋白(tubulin)分布明顯改變。
　　【結(jié)論】mTOR抑制劑III—PP242通過下調(diào)p-mTOR、p-S6K1和Survivin蛋白可明顯增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞株A2780和SKOV3泰素化療的敏感性。
　　第二部分STAT3抑制劑逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)

4、胞株化療耐藥的研究
　　【目的】通過檢測信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3在卵巢癌順鉑敏感細(xì)胞株OV2008和配對的順鉑耐藥細(xì)胞株C13K中的表達(dá)情況,研究Stat3小分子抑制劑Stattic對OV2008及C13K細(xì)胞順鉑治療的影響,并探討其分子機(jī)制。
　　【方法】半定量RT-PCR檢測OV2008和C13K細(xì)胞Stat3的mRNA表達(dá)水平,蛋白免疫印跡法檢測磷酸化Stat3(p-Stat3)的蛋白表達(dá)水平。四甲基偶氮唑

5、藍(lán)(MTT)比色法檢測單用順鉑對細(xì)胞增殖的影響。流式細(xì)胞儀分析卵巢癌細(xì)胞株在Stat3抑制劑和(或)順鉑作用下的凋亡率及蛋白免疫印跡法檢測p-Stat3、p-Akt和抗凋亡因子Bcl-XL的蛋白表達(dá)。
　　【結(jié)果】與順鉑敏感細(xì)胞株OV2008相比,順鉑耐藥細(xì)胞株C13K的Stat3mRNA和p-Stat3蛋白均過表達(dá)。小分子抑制劑Stattic可阻斷Stat3的活化,導(dǎo)致順鉑誘導(dǎo)OV2008和C13K細(xì)胞的凋亡率明顯增加。Stat