ICBP90表達及其對膽囊癌細胞化療敏感性影響的研究.pdf

1、目的：通過檢測生長抑素作用后膽囊癌細胞內(nèi)ICBP90蛋白表達的變化，探討生長抑素增強膽囊癌細胞對阿霉素化療敏感性的分子機制。 方法：（1）選取人膽囊癌細胞株GBC-SD，常規(guī)體外培養(yǎng)，并驗證其成瘤性及病理組織類型；GBC-SD細胞分為4組：單獨生長抑素作用組、單獨阿霉素作用組、聯(lián)合用藥組（生長抑素預處理24h后，再加入阿霉素）和對照組。（2）在藥物作用24h，48h，72h和96h后，采用MTT方法檢測各組細胞生長曲線。（3）在

2、藥物作用24，36，48和60h后，采用Annexin V/PI方法分別檢測各組細胞的凋亡情況；（4）在生長抑素作用12、24、36和48h后，采用流式細胞儀檢測GBC-SD細胞內(nèi)DNA的含量，確定各時間點細胞所處周期。（5）采用western blot 方法檢測在生長抑素作用12、24、36和48h后GBC-SD細胞內(nèi)Rb、E2F-1、ICBP90和Topoisomerase Ⅱα各蛋白的表達變化，以及在生長抑素作用24后GBC-SD

3、細胞內(nèi)P53和Bax蛋白表達的變化。 結(jié)果：（1）GBC-SD細胞在體外常規(guī)培養(yǎng)，生長旺盛；裸鼠接種4周后可見明顯荷瘤，病理切片鏡下見腺癌組。（2）對GBC-SD細胞聯(lián)合應(yīng)用生長抑素和阿霉素，可明顯抑制膽囊癌細胞的生長，并呈現(xiàn)濃度-效應(yīng)依賴關(guān)系，對癌細胞的殺傷作用明顯強于單用阿霉素組（P<0.05）。（3）聯(lián)合用藥組和單獨阿霉素作用組出現(xiàn)明顯的細胞凋亡（P<0.05），而且細胞凋亡具有時間依賴性的，其中聯(lián)合用藥組的細胞凋亡更顯著

4、（P<0.05）；而單獨生長抑素組卻沒有出現(xiàn)明顯的細胞凋亡（P>0.05）。（4）在生長抑素作用后，GBC-SD細胞出現(xiàn)明顯的S期阻滯（P<0.05），并且S期細胞比例在24h達到高峰，隨后逐漸降低。（5）生長抑素作用12h、24h和36h后，各蛋白表達變化情況如下：Rb和E2F-1蛋白表達增多，在12h達到高峰（P<0.05）；ICBP90蛋白的表達增多，在24h達到高峰（P<0.05）；而Topoisomerase Ⅱα蛋白的表達也

5、增多，在24h達到高峰，隨后保持一平臺（P<0.05）。另外，生長抑素作用24h后，P53和Bax蛋白的表達無明顯變化（P>0.05）。 結(jié)論：生長抑素增強阿霉素對膽囊癌細胞的殺傷作用，并非是由生長抑素與阿霉素本身的細胞毒性作用疊加所致，而與生長抑素影響膽囊癌細胞的周期和細胞內(nèi)Topoisomerase Ⅱα蛋白的表達有關(guān)。生長抑素誘導膽囊癌細胞發(fā)生S期阻滯，可能與其改變細胞內(nèi)Rb、E2F-1蛋白的表達有關(guān)；而Topoisome