食管腺癌細(xì)胞雌激素受體表達(dá)與化療敏感性的研究.pdf

1、目的：
　?、偬接懘萍に厥荏w ERα、ERβ及其亞型在 Barrett’s食管細(xì)胞系及食管腺癌細(xì)胞系細(xì)胞中的表達(dá)，并比較兩種細(xì)胞系的表達(dá)差異。
　?、谔接懖煌萍に厥荏wERα和ERβ表達(dá)的食管腺癌細(xì)胞系對(duì)化療藥5-FU、順鉑、他莫昔芬的敏感性，并對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析，以期發(fā)現(xiàn)化療敏感性與雌激素受體表達(dá)的關(guān)系。
　?、厶接?-FU、順鉑聯(lián)合他莫昔芬對(duì)不同雌激素受體表達(dá)細(xì)胞系細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　方法：
　　

2、①對(duì)Barrett’s食管細(xì)胞系BAR-T、ChTERT、 GiTERT、 QhTERT及食管腺癌細(xì)胞系 OE19、OE33、SKGT4、OACP4C、FLO-1、OACM5.1進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至細(xì)胞融合度約70％時(shí)收割細(xì)胞、提取蛋白，用EZQ工具包測(cè)蛋白濃度。采用Western blotting方法測(cè)定雌激素受體ERα、ERβ及其亞型在不同食管細(xì)胞系細(xì)胞中的表達(dá)水平。
　?、诶肕TS法測(cè)定最佳的MTS觀察時(shí)間；建立各細(xì)胞系96小

3、時(shí)生長(zhǎng)曲線；根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線決定96孔板每孔種植細(xì)胞的數(shù)量；對(duì)種植于96孔板 OE19、OE33、SKGT4、OACP4C、FLO-1、OACM5.1等細(xì)胞系細(xì)胞分別予不同濃度5-FU、順鉑、他莫昔芬化學(xué)治療72小時(shí)，比較各細(xì)胞系對(duì)藥物的不同敏感性并將其結(jié)果與雌激素受體表達(dá)結(jié)果進(jìn)行Spearman相關(guān)分析。
　?、鄹鶕?jù)其雌激素受體表達(dá)的不同，我們選取雌激素受體ERβ高表達(dá)、ERα低表達(dá)的OE19及雌激素受體ERβ低表達(dá)、ERα高表

4、達(dá)OACM5.1作為聯(lián)合化療對(duì)象。對(duì)選取的細(xì)胞系進(jìn)行5-FU聯(lián)合他莫昔芬及順鉑聯(lián)合他莫昔芬聯(lián)合化學(xué)治療72小時(shí)，對(duì)其生長(zhǎng)情況進(jìn)行MTS檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　?、偻ㄟ^(guò)Western blotting檢測(cè)，Barrett’s食管細(xì)胞系細(xì)胞與食管腺癌細(xì)胞系細(xì)胞均不同程度地表達(dá)ERα或者ERβ，ERα表達(dá)以61kDa、90kDa亞型為主，ERβ以59kDa、51.5kDa及44.9kDa亞型為主。然而，與Brrett’s食管細(xì)胞系相

5、比，食管腺癌細(xì)胞系細(xì)胞雌激素受體無(wú)論ERα或者ERβ表達(dá)水平均較高，而且在亞型ERβ44.9kDa表達(dá)上，兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　②最佳的MTS觀察時(shí)間為加MTS溶液后4小時(shí)內(nèi)，以2小時(shí)或3小時(shí)觀察為最佳，而24小時(shí)則不適宜觀察。根據(jù)各細(xì)胞系96小時(shí)生長(zhǎng)曲線，其每孔的適宜種植細(xì)胞數(shù) OE19、OE33、SKGT4應(yīng)為2000個(gè)每孔，OACP4C、FLO-1、OACM5.1應(yīng)為3000個(gè)每孔。各細(xì)胞系對(duì)5-

6、FU、順鉑、他莫昔芬藥物的化療敏感性不同，對(duì)其不同的敏感性與雌激素受體表達(dá)行Spearman相關(guān)分析得知，在各細(xì)胞系中，5-FU、順鉑、他莫昔芬的敏感性與雌激素受體 ERα61kDa、ERα90kDa、 ERβ59kDa、ERβ51.5kDa、ERβ44.9kDa亞型表達(dá)無(wú)相關(guān)性，而雌激素受體亞型ERβ51.5kDa與他莫昔芬的敏感性呈負(fù)相關(guān)。
　?、墼诖萍に厥荏wERβ高表達(dá)、ERα低表達(dá)細(xì)胞系OE19中，他莫昔芬能顯著增加順鉑對(duì)

7、細(xì)胞的殺傷作用，而他莫昔芬聯(lián)合5-FU則無(wú)此作用。在雌激素受體ERβ低表達(dá)、ERα高表達(dá)細(xì)胞系OACM5.1中，他莫昔芬聯(lián)合順鉑或5-FU均不能增加其殺傷作用。
　　結(jié)論：
　　①Barrett’s食管細(xì)胞系細(xì)胞與食管腺癌細(xì)胞系細(xì)胞均不同程度地表達(dá)ERα、ERβ及其亞型，然而食管腺癌細(xì)胞系細(xì)胞雌激素受體 ERα、ERβ表達(dá)水平均較高，尤其是 ERβ44.9kDa的表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示我們可以將此亞型作為鑒別Barrett

8、’s食管和食管腺癌的指標(biāo)之一。同時(shí)，我們?cè)谑彻芟侔┘?xì)胞系細(xì)胞觀察到ERα61kDa亞型的表達(dá)。
　?、诓煌氖彻芟侔┘?xì)胞系細(xì)胞對(duì)5-FU、順鉑、他莫昔芬的化療敏感性是不同的。細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的化療敏感性與雌激素受體ERβ51.5kDa的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示雌激素受體某些亞型的表達(dá)與他莫昔芬化療敏感性密切相關(guān)。
　　③在高雌激素受體β、低α表達(dá)的食管腺癌細(xì)胞系中，他莫昔芬與順鉑具有協(xié)同殺傷作用。在高雌激素受體α、低β表達(dá)的食管腺癌