DEPTOR調(diào)節(jié)食管鱗狀細胞癌化療敏感性的不同功能的研究.pdf

1、一、研究背景與目的
　　DEPTOR作為mTORC1及mTORC2內(nèi)源性抑制因子，在調(diào)控mTOR信號通路活性起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中DEPTOR的表達被下調(diào)，如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、慢性髓系白血病，這使得mTOR信號通路處于過度激活狀態(tài)而促進腫瘤生長。然而在部分多發(fā)性骨髓瘤中DEPTOR卻意外的處于過表達狀態(tài)，DEPTOR的高表達可抑制mTOR通路的活性，通過負反饋機制最終導(dǎo)致Akt的活化，促進多發(fā)性骨髓瘤細胞的存活。目

2、前，已有兩篇文章報道了DEPTOR與食管癌預(yù)后的關(guān)系。其中一研究結(jié)果顯示:DEPTOR在食管鱗癌患者中的表達上調(diào)，并提示患者較短的生存期。然而，另一研究結(jié)果表明:DEPTOR的表達在食管鱗癌中下調(diào)，并提示較差的預(yù)后。根據(jù)這兩組研究的結(jié)論提示我們，DEPTOR在食管癌中的表達量及其在預(yù)測食管鱗狀細胞癌(ESCC)預(yù)后中的作用，仍未定論，存在一定的爭議。
　　我們本次實驗的目的在于:
　　1、確定DEPTOR在食管癌中的表達情況

3、，及其對食管鱗狀細胞癌預(yù)后的影響。
　　2、DEPTOR對食管鱗狀細胞癌化療反應(yīng)的影響。
　　二、研究方法
　　1、在南方醫(yī)院胸外科收集23例食管癌標本，將標本分為兩部分，一部分進行組織固定，包埋、切片及免疫組化染色，觀察DEPTOR蛋白在組織中的表達部位以及表達水平;另一部分組織標本研磨并提取蛋白，采用免疫印跡的方法檢測方法檢測DEPTOR蛋白在組織中的表達水平。
　　2、于上海芯超公司購買組織芯片2套，共含1

4、80例食管癌標本。進行免疫組化染色，對DEPTOR的染色結(jié)果進行評分，并做生存期分析。
　　3、選取4種食管癌細胞系，1種永生化正常食管上皮細胞系，采用免疫印跡的方式，檢測該5種細胞中DEPTOR的表達水平，并根據(jù)DEPTOR的表達水平，以永生化正常食管上皮為參考，進行分類。
　　4、對4種食管癌細胞，培養(yǎng)過程中加入化療藥物，采用CCK-8的檢測方式，觀察4種食管癌細胞的存活情況。對4種食管癌細胞進行干擾和過表達，降低和升高

5、DEPTOR在細胞中的表達水平，并加入化療藥物，探究DEPTOR表達水平的變化，對細胞化療敏感性的影響。
　　5、利用免疫印跡方式，探究DEPTOR影響食管癌細胞化療敏感性的具體分子機制。
　　三、研究結(jié)果
　　我們的研究結(jié)果顯示DEPTOR在腫瘤組織中的表達顯著增加，并且在早期ESCC患者中提示較高的生存率。體外研究顯示，可根據(jù)正常食管鱗狀上皮細胞系HET-1A中的DEPTOR表達量，將ESCC細胞系分為相對高和低D