同時放化療敏感性不同宮頸癌組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：采用雙向凝膠電泳(2-DE)結(jié)合MALDI-170F-MS質(zhì)譜分析技術(shù)比較同時放化療高敏感和低敏感中晚期宮頸癌組織之間蛋白質(zhì)組的差異，識別和鑒定高敏感組和低敏感組之間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，初步確定中晚期宮頸癌同時放化療敏感性相關(guān)的蛋白質(zhì)，為中晚期宮頸癌患者同時放化療敏感性的預(yù)測提供理論依據(jù)。 方法：收集治療前的中晚期宮頸癌組織標(biāo)本，病理診斷均為中分化鱗狀細(xì)胞癌，置于-80℃超低溫冰箱保存。在進(jìn)行同時放化療后，根據(jù)WHO實(shí)體瘤療

2、效判斷標(biāo)準(zhǔn)，將收集的宮頸癌組織標(biāo)本10例分為高敏感組(5例)和低敏感組(5例)。提取組織總蛋白，采用2-DE分離蛋白質(zhì)，得到高敏感組和低敏感組的2-DE圖譜，采用PD-quest 7.0軟件進(jìn)行匹配和差異分析，識別兩組之間表達(dá)差異蛋白點(diǎn)。從膠中切取差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)原位酶解、酶解產(chǎn)物進(jìn)行MALDI-FOF-MS分析，獲取肽質(zhì)量指紋圖，數(shù)據(jù)庫搜索鑒定蛋白質(zhì)。應(yīng)用Western Blot方法檢測其中4個差異表達(dá)蛋白在以上10例宮頸癌組織標(biāo)本

3、中的表達(dá)，觀察它們在高敏感組和低敏感組中的表達(dá)是否與蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測結(jié)果一致。進(jìn)一步收集同時放化療療效不同的宮頸癌組織標(biāo)本，其中高敏感組60例，低敏感組35例，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測這4種差異表達(dá)蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)并分析其臨床病理意義。 結(jié)果：建立了分辨率高，重復(fù)性好的宮頸癌同時放化療高敏感組和低敏感組的雙向凝膠電泳(2-DE)圖譜。高敏感組蛋白點(diǎn)數(shù)為781±74個，低敏感組蛋白點(diǎn)數(shù)為766±52個，組間平均匹配率為87.

4、6％。選擇部分差異在2倍以上的蛋白斑點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析、19個差異表達(dá)蛋白被成功鑒定，其中9個蛋白質(zhì)在高敏感組高表達(dá)：血紅蛋白β亞單位、Caspase-14前體、鈣調(diào)節(jié)蛋白、S100-A9蛋白/MRP-14蛋白、半乳凝素7、HSKERC4、角蛋白19、肌動蛋白； 10個蛋白質(zhì)在高敏感組低表達(dá)：乙型肝炎表面(抗體)輕鏈片段、核纖層蛋白-B1、WARS蛋白、黃素還原酶、谷氨酸脫氫酶1、NMP238、視黃醛脫氫酶1、AFl65172、復(fù)制型DNA

5、多聚酶亞單位、HSP70。免疫印跡和免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：HSP70和NMP238在低敏感組中的表達(dá)率顯著高于高敏感組，而S100-A9蛋白/MRP-14蛋白和半乳凝素7在高敏感組中的表達(dá)率顯著高于低敏感組，這一結(jié)果與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果一致。 結(jié)論：本研究應(yīng)用2-DE技術(shù)獲得了同時放化療高敏感組和低敏感組宮頸癌組織的蛋白質(zhì)2-DE圖譜，質(zhì)譜鑒定了19個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)；部分差異蛋白質(zhì)經(jīng)免疫組化和Western blot驗(yàn)證，這些