胃癌及癌旁組織定量比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：采用熒光差異顯示凝膠電泳(DIGE)蛋白質(zhì)組學(xué)方法及質(zhì)譜技術(shù)篩選并鑒定胃癌組織差異表達蛋白質(zhì)，以期尋找胃癌特異的腫瘤標記物，用于臨床胃癌篩查和診斷，并為尋找胃癌治療藥物靶點、了解胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制提供思路。 方法：采用DIGE技術(shù)篩選Cy3、Cy5及Cy2熒光素標記的胃癌及對應(yīng)癌旁組織差異表達蛋白質(zhì)，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)或串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進行鑒定并分析，對可能有價值的差異表達蛋白質(zhì)

2、采用組織芯片免疫組化技術(shù)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)分別從蛋白質(zhì)水平及信使核糖核酸(mRNA)水平進行驗證。 結(jié)果：共篩選出33個差異表達蛋白質(zhì)點，其中9個蛋白質(zhì)點在胃癌組織中上調(diào)，24個蛋白質(zhì)點下調(diào)，對22個蛋白質(zhì)點采用質(zhì)譜技術(shù)成功鑒定。根據(jù)蛋白質(zhì)功能的不同，這些差異表達的蛋白質(zhì)可以分為7類：分子伴侶、細胞骨架蛋白、代謝酶類、細胞周期相關(guān)蛋白、細胞增殖、分化和凋亡相關(guān)蛋白和脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白。錳超氧化物歧化酶、熱休

3、克蛋白60、突變節(jié)蛋白等在胃癌中高表達；熱休克蛋白27、前列腺素F合酶、硒結(jié)合蛋白1、鋅指蛋白160、微管蛋白α6、真核生物翻譯延伸因子1，α1(eTEF 1 A 1)等在胃癌組織中低表達。 結(jié)論：DIGE技術(shù)是篩選胃癌組織差異表達蛋白質(zhì)有效方法。錳超氧化物歧化酶、突變結(jié)蛋白、HSP 60、HSP 27、前列腺合酶F、eTEF 1 A 1等可望成為胃癌診斷的特異標記物。對若干差異蛋白的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平進行的分析發(fā)現(xiàn)，基因轉(zhuǎn)錄和