2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:從豬帶絳蟲(Taenia solium)、牛帶絳蟲(Taenia saginata)和亞洲帶絳蟲(Taenia asiatica)成蟲 cDNA文庫中識別出谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferase,GST)基因,生物信息學(xué)分析預(yù)測三者編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。對牛帶絳蟲成蟲GST(TasGST)進(jìn)行克隆、表達(dá)和免疫學(xué)特性初步分析,為進(jìn)一步研究三種人體帶絳蟲成蟲 GST在絳、囊蟲病診斷和疫苗的應(yīng)用價值提供

2、實驗依據(jù)。
  方法:利用生物信息學(xué)方法從三種人體帶絳蟲成蟲 cDNA文庫中識別出 GST基因,利用美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)(ExPASY,http://ca.expasy.org/)中有關(guān)基因和蛋白的序列和結(jié)構(gòu)信息分析的各種工具,結(jié)合其它生物信息學(xué)分析軟件包(如Pcgene和Vector NTI suite等)分析、預(yù)測

3、三者基因編碼蛋白質(zhì)的理化特性、翻譯后的修飾位點、功能域、亞細(xì)胞定位、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、三維空間構(gòu)象等,預(yù)測三者編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。將TasGST克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒 pET-28a(+)中,在大腸埃希菌 BL21/DE3中用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進(jìn)行純化,純化蛋白免疫 SD大鼠制備免疫血清,用Western Blot ting方法分析重組蛋白的免

4、疫原性和免疫反應(yīng)性。
  結(jié)果:三者序列都包含完整開放閱讀框,為 GST的全長基因,推導(dǎo)出的氨基酸序列與GenBank中其它絳蟲GST氨基酸序列的一致性均超過85%。三者編碼的蛋白在氨基酸數(shù)目、蛋白理化性質(zhì)、活性位點的B細(xì)胞線性表位、亞細(xì)胞定位等方面存在一定差異。將預(yù)測的線性表位標(biāo)注在三種人體帶絳蟲成蟲 GST三維結(jié)構(gòu)的表面,結(jié)果顯示三種帶絳蟲的主要線性表位在空間結(jié)構(gòu)上處于相距較遠(yuǎn)的分子表面。三種人體帶絳蟲成蟲與其它物種 GST氨

5、基酸序列構(gòu)建進(jìn)化樹結(jié)果顯示,三者的親緣關(guān)系接近。對TasGST基因進(jìn)行克隆、表達(dá),雙酶切及測序結(jié)果均表明重組質(zhì)粒pET-28a(+)-TasGST構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果表明目的基因在大腸桿菌BL-21/DE3中獲得可溶性表達(dá),經(jīng)親和層析獲得了純化蛋白。TasGST重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識別,具有免疫原性;TasGST重組蛋白可被感染囊尾蚴的牛血清和牛帶絳蟲患者血清識別,具免疫反應(yīng)性。
  結(jié)論:利用生物信息學(xué)對三

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