Tim-3-Galectin-9信號(hào)通路在乙肝相關(guān)性肝癌患者中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分Tim-3及Galectin-9在肝癌中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：檢測(cè)Tim-3及Galectin-9在肝癌中的表達(dá),探討Tim-3在肝癌中的表達(dá)與臨床預(yù)后之間的關(guān)系。
　　方法：收集38例臨床新鮮肝癌組織標(biāo)本,其中包括30例HBV+,8例HBV-,采用流式細(xì)胞檢測(cè)T細(xì)胞上Tim-3及Galectin-9的表達(dá),免疫組化化學(xué)染色法檢測(cè)組織中Tim-3的表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其mRNA的表達(dá)。同時(shí)收集了2007-2

2、010年間99例HBV+的肝癌組織標(biāo)本,比較Tim-3的表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：流式細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Galectin-9在肝癌微環(huán)境中主要表達(dá)在Kuffer細(xì)胞上,陽性率為40％,而對(duì)于HBV+及HBV-的肝癌患者中Galectin-9在Kuffer細(xì)胞上的表達(dá)率有顯著差異。Tim-3在肝癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織,且在HBV+肝癌患者中的表達(dá)高于HBV-患者,同時(shí)在CD4+T細(xì)胞中的表達(dá)稍高于CD8+T細(xì)胞,相應(yīng)的Tim-

3、3的mRNA的相對(duì)表達(dá)量呈同步改變。生存分析發(fā)現(xiàn),Tim-3表達(dá)率較高的患者3年術(shù)后生存率明顯短于表達(dá)率較低的患者。
　　結(jié)論：Tim-3以及Galectin-9在腫瘤組織中明顯高表達(dá),且Tim-3的表達(dá)與有無HBV感染有關(guān),Tim-3的高表達(dá)提示較差的預(yù)后,因此,Tim-3可以作為一個(gè)評(píng)估肝癌預(yù)后的指標(biāo)。
　　第二部分Tim-3/Galectin-9通路對(duì)CD4+T細(xì)胞功能的影響
　　目的：研究Tim-3/Galec

4、tin-9通路激活以及被阻斷后肝癌微環(huán)境中CD4+T細(xì)胞功能改變。
　　方法：提取人新鮮肝癌組織中侵潤的淋巴細(xì)胞,用流式細(xì)胞技術(shù)分析免疫細(xì)胞的表型及細(xì)胞因子,同時(shí)分選Tim-3+CD4+T細(xì)胞與Kuffer細(xì)胞共培養(yǎng),利用Tim-3阻斷性抗體抑制Tim-3/Galectin-9通路的激活,再用流式細(xì)胞技術(shù)分析Tim-3+CD4+T細(xì)胞所表達(dá)的細(xì)胞因子的改變,同時(shí)用Elispot檢測(cè)其IFN-γ的表達(dá)變化,并且用CSFE標(biāo)記實(shí)驗(yàn)鼠與

5、對(duì)照組的Tim-3+CD4+T細(xì)胞,觀察其增殖改變,最后用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控基因P16、P21、CDK7、CDC2等表達(dá),判斷其細(xì)胞周期改變。
　　結(jié)果：肝癌患者微環(huán)境中的Tim-3+CD4+T細(xì)胞的功能呈受抑制狀態(tài),其分泌的IFN-γ、IL-2明顯少于Tim-3-CD4+T細(xì)胞,且反應(yīng)其細(xì)胞活性的標(biāo)志HLA-DR、Ki-67也明顯減少,但使用Tim-3阻斷性抗體后,這些細(xì)胞因子及表面標(biāo)志的表達(dá)水平上調(diào),提示了這群細(xì)胞