調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的免疫調(diào)節(jié)作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis，PBC)是一種自身免疫性肝臟疾病。好發(fā)于中年婦女，組織學(xué)上以小葉間膽管進(jìn)行性損傷表現(xiàn)為主;血清中出現(xiàn)堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)和免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)升高和多種自身抗體陽性，其中以M2型抗線粒體抗體最為特異。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(RegulatoryT cell，Treg)是一類重要的免

2、疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，控制著體內(nèi)自身免疫反應(yīng)，在免疫耐受和動態(tài)平衡中起中心作用。機(jī)體在健康的情況下，功能完好的Treg可以使肝臟中的免疫反應(yīng)處于抑制狀態(tài)。一旦Treg數(shù)量和功能出現(xiàn)受損，免疫耐受就被打破。CD3+細(xì)胞可以包括經(jīng)典T細(xì)胞(CD3+CD56-)和自然殺傷T(Natural killerT，NKT)細(xì)胞(CD3+CD56+)。NKT細(xì)胞被報道可促進(jìn)自身免疫反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與破壞Th1/Th2類型反應(yīng)平衡，調(diào)節(jié)其分泌細(xì)胞因子有關(guān)。本課

3、題通過對臨床患者外周血中細(xì)胞因子和淋巴細(xì)胞分布進(jìn)行檢測，體外實驗研究其數(shù)量和功能上的改變，發(fā)現(xiàn)這兩種細(xì)胞在PBC發(fā)病中的作用和相互關(guān)系，旨在找到一條影響PBC發(fā)病的免疫機(jī)制。
　　方法：
　　通過收集，整理和分析55例PBC患者的臨床資料，并用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中Treg和NKT細(xì)胞的比例，數(shù)量和酶聯(lián)免疫實驗(Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)檢測相關(guān)細(xì)胞因子水平。分離出樣本中的

4、單個核細(xì)胞，分選培養(yǎng)以通過體外實驗檢測其功能。
　　結(jié)果：
　　第一部分:結(jié)果表明PBC患者的Treg數(shù)量和產(chǎn)生白介素-10(Interleukin-10，IL-10)的能力都顯著下降; PBC患者的Treg難以有效抑制T細(xì)胞的增殖和干擾素(interferon-γ，IFN-γ)的產(chǎn)生，Treg具有抑制T細(xì)胞對膽管上皮細(xì)胞的殺傷能力的作用，PBC患者的Treg細(xì)胞的這種抑制作用低于健康對照組;另外，PBC患者DC表面的CD8

5、0/CD86共刺激分子顯著增高并且在自身抗體刺激后上升更為顯著;PBC患者PBMC抑制肝星形細(xì)胞表達(dá)的平滑肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)能力減弱;PBC患者的Treg抑制DC表面CD86的表達(dá)能力顯著減弱。PBC患者PBMC抑制肝星形細(xì)胞表達(dá)的α-SMA能力減弱。
　　第二部分:結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在PBC患者外周血中CD3+CD56+ NKT細(xì)胞數(shù)量顯著上升;而經(jīng)典T細(xì)胞(CD3+CD56-)的數(shù)量與健

6、康成人無明顯差異。PBC患者外周血血漿中，IL-17及其相關(guān)上下游細(xì)胞因子水平均上升;胞內(nèi)染色發(fā)現(xiàn)CD3+CD56+ NKT細(xì)胞是產(chǎn)生IL-17最多的一群細(xì)胞;用分離的自身抗體刺激PBMC后，上清中IL-17水平顯著上升，并且上升最多的來源即為CD3+CD56+ NKT細(xì)胞;IL-17可以使肝星形細(xì)胞活化產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming growth factor-β，TGF-β)和表達(dá)α-SMA，且呈劑量依賴，PBC患者的P