血管外膜損傷對(duì)大鼠頸動(dòng)脈收縮功能影響機(jī)制及藥物干預(yù)研究.pdf

1、動(dòng)脈壁由內(nèi)膜、中膜、外膜三層結(jié)構(gòu)組成。越來(lái)越多的證據(jù)顯示外膜調(diào)節(jié)血管功能的作用遠(yuǎn)大于其作為血管壁支撐結(jié)構(gòu)的作用。近年來(lái)有關(guān)血管外膜在調(diào)節(jié)血管平滑肌收縮功能中的作用方面的研究日益受到關(guān)注。用硅膠管包裹兔頸動(dòng)脈的動(dòng)物模型已成為研究動(dòng)脈粥樣硬化的經(jīng)典動(dòng)物模型。此動(dòng)物模型以硅膠管包裹血管導(dǎo)致血管外膜慢性損傷但不直接損傷血管中膜及內(nèi)膜，產(chǎn)生具有人體動(dòng)脈粥樣硬化早期特征的新生內(nèi)膜病損；除新生內(nèi)膜形成外，硅膠管包裹還能引起與早期人體動(dòng)脈粥樣硬化病變相

2、似的血管功能的變化：對(duì)5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)的收縮血管活性高敏感。利用外膜參與血管張力調(diào)節(jié)的機(jī)制建立血管外膜損傷致血管痙攣的動(dòng)物模型有助于深入認(rèn)識(shí)外膜調(diào)節(jié)血管功能的作用機(jī)制。
　　 血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)是還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NAD(P)H)氧化酶的強(qiáng)刺激劑，能

3、促進(jìn)血管活性氧(reactive oxygen species，ROS)的生成，ROS是血管張力的重要調(diào)節(jié)劑。既往研究已證實(shí)在外膜損傷動(dòng)物模型血管組織AngⅡ受體高表達(dá)。此外眾多研究證實(shí)氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)在血管損傷發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。有關(guān)AngⅡ及其受體是否通過(guò)氧化應(yīng)激介導(dǎo)參與血管外膜調(diào)節(jié)血管張力的作用有待進(jìn)一步研究。
　　 血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的收縮由細(xì)胞內(nèi)Ca

4、2+濃度及收縮器對(duì)Ca2+的敏感性?xún)煞N機(jī)制調(diào)節(jié)。RhoA/Rho激酶(Rhok)信號(hào)傳導(dǎo)通路是VSMC Ca2+的敏感性的主要調(diào)節(jié)機(jī)制。既往研究已證實(shí)血管外膜慢性炎癥刺激VSMC RhoA/RhoK信號(hào)傳導(dǎo)通路活性增強(qiáng)，有關(guān)RhoA/RhoK信號(hào)傳導(dǎo)通路在血管外膜調(diào)節(jié)血管張力中的作用以及血管外膜刺激通過(guò)何途徑激活RhoA/RhoK信號(hào)傳導(dǎo)通路需進(jìn)一步研究。
　　 通心絡(luò)超微粉劑是根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡(luò)病理論研制的中藥制劑，具有“搜風(fēng)通絡(luò)”

5、，緩解冠狀動(dòng)脈痙攣的作用。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家從不同方面對(duì)中醫(yī)絡(luò)病學(xué)理論指導(dǎo)下研制的復(fù)方制劑通心絡(luò)超微粉劑進(jìn)行了研究。既往研究證實(shí)通心絡(luò)超微粉劑能改善血管內(nèi)皮功能，調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞RhoA/RhoK信號(hào)傳導(dǎo)通路，抑制血管痙攣。通心絡(luò)超微粉劑對(duì)外膜損傷所致的血管痙攣是否有效及其機(jī)制需進(jìn)一步研究。
　　 目的:
　　 基于以上研究及理論基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用硅膠管包裹大鼠頸動(dòng)脈外膜，構(gòu)建外膜慢性損傷介導(dǎo)血管收縮性增強(qiáng)的動(dòng)物模型。在此

6、基礎(chǔ)上，(1)探討AngⅡ及其受體、氧化應(yīng)激反應(yīng)以及RhoA/RhoK信號(hào)傳導(dǎo)通路在外膜損傷致血管收縮性增強(qiáng)中的作用；(2)應(yīng)用通心絡(luò)超微粉劑進(jìn)行干預(yù)，觀察及探討通心絡(luò)超微粉劑緩解血管痙攣的機(jī)制。
　　 方法:
　　 用硅膠管經(jīng)血管外膜包裹大鼠頸動(dòng)脈建立單側(cè)頸動(dòng)脈外膜損傷的大鼠模型。分別于術(shù)后3天(n=4)、1周(n=4)、2周(n=4)取雙側(cè)頸動(dòng)脈標(biāo)本，HE染色，光鏡下觀察血管外膜慢性損傷對(duì)血管形態(tài)學(xué)的影響，應(yīng)用免疫組

7、化方法觀察受損部位血管AT2R及p22phox蛋白表達(dá)的變化。于包管術(shù)后1周(n=10)，用超聲外周血管血流量測(cè)定儀測(cè)量大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈血流量，并觀察血管對(duì)局部應(yīng)用5-HT的反應(yīng)。然后進(jìn)行藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)。Wistar Kyoto大鼠分成7組(每組n=12)分別給予纈沙坦(30mg/kg.d灌胃×14天)、法舒地爾(15mg/kg.d腹腔注射×10天)、纈沙坦+法舒地爾以及不同劑量通心絡(luò)超微粉劑(200-800mg/kg.d，灌胃×14天)進(jìn)

8、行干預(yù)，法舒地爾于術(shù)前3天開(kāi)始用至術(shù)后1周，其它所有藥物均于包管手術(shù)前1周開(kāi)始用至術(shù)后1周，對(duì)照組給予等量飲用水灌胃。于包管術(shù)后1周，用上述方法測(cè)各組大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈血流量、血管對(duì)5-HT的反應(yīng)性；取大鼠心腔血用ELISA方法測(cè)血清AngⅡ濃度；取大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈，用HE染色觀察血管形態(tài)學(xué)變化；用Westernblot方法測(cè)血管組織血管緊張素Ⅱ1型受體(AngiotensinⅡ Type1 Receptor，AT1R)、血管緊張素Ⅱ2型受體

9、(AngiotensinⅡ Type2 Receptor，AT2R)、p-MYPT1thr696及p22phox蛋白表達(dá)；用RT-PCR方法檢測(cè)血管組織AT1R、AT2R、RhoK、p22phox mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1、血管外膜慢性損傷能引起血管收縮功能的改變，表現(xiàn)為血管中膜平滑肌慢性收縮、血流量降低及對(duì)血管5-HT的收縮血管反應(yīng)敏感性增強(qiáng)。血管收縮功能的改變出現(xiàn)在內(nèi)膜增生性病變之前。
　　 2

10、、硅膠管包裹大鼠頸動(dòng)脈導(dǎo)致血管外膜慢性損傷，慢性激活循環(huán)RAS系統(tǒng)及上調(diào)血管局部AngⅡ受體，AngⅡ作用于上調(diào)的AT1R，通過(guò)氧化應(yīng)激反應(yīng)介導(dǎo)，激活血管平滑肌RhoA/RhoK信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)導(dǎo)致血管收縮性增強(qiáng)。AT2R上調(diào)在AT1R抑制中具有重要的作用。
　　 3、通心絡(luò)超微粉劑能有效改善及預(yù)防外膜損傷所致的血管慢性痙攣及血管對(duì)5-HT反應(yīng)的高敏感。通心絡(luò)超微粉劑主要是通過(guò)降低循環(huán)血AngⅡ水平、抑制外膜損傷所致的明顯增強(qiáng)的氧化