血管外膜損傷大鼠NF-κB、IL-6、IL-10的表達(dá)及通心絡(luò)的干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　 動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是一種炎癥性疾病而不是單純的由于脂質(zhì)沉積所致，是多因素共同作用的結(jié)果。許多炎性細(xì)胞因子參與AS的形成過程，其中白細(xì)胞介素作為反應(yīng)免疫炎癥的指標(biāo)，其升高水平與心血管事件顯著相關(guān)。最近的研究證實(shí)，血管外膜損傷在某些個(gè)體可成為AS啟動(dòng)的始發(fā)門戶，為此本實(shí)驗(yàn)采用套管法建立大鼠左頸動(dòng)脈外膜損傷模型，并給予通心絡(luò)超微粉劑（TXL）干預(yù)治療，觀察血管外膜損傷后對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

2、-核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）及血清白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）水平的影響，以探討外膜與炎癥在動(dòng)脈硬化形成中的作用機(jī)制及通心絡(luò)超微粉劑的保護(hù)作用。
　　 材料與方法
　　 1、動(dòng)物模型制備和實(shí)驗(yàn)分組
　　 取30只12周齡的健康雄性Wistar Kyoto大鼠，體重200～270克（購(gòu)買于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室）適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為3組，每組10只。
　　 空白對(duì)照組：不予任

3、何處理和干預(yù)。
　　 外膜損傷組：行硅膠管包裹術(shù)。常規(guī)麻醉后，消毒頸部正中皮膚，解剖分離出左側(cè)頸總動(dòng)脈，包裹硅膠管一周構(gòu)建模型。術(shù)前術(shù)后一周均每日一次以等量蒸餾水灌胃。術(shù)后一周，行第二次手術(shù)留取標(biāo)本進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。
　　 通心絡(luò)（TXL）治療組：通心絡(luò)超微粉劑（400mg/kg.d）每日一次灌胃。TXL藥物應(yīng)用一周，行硅膠管包裹大鼠左側(cè)頸動(dòng)脈手術(shù)，術(shù)后繼續(xù)TXL藥物應(yīng)用一周，行第二次手術(shù)留取標(biāo)本進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。
　　

4、 2、病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)
　　 術(shù)后取左側(cè)頸總動(dòng)脈包裹血管段及空白組相應(yīng)血管段，常規(guī)病理蠟塊制作，切片，行NF-κBp65免疫組化染色，光鏡觀察及計(jì)數(shù)動(dòng)脈壁NF-κB陽性活化情況。
　　 3、細(xì)胞因子IL-6、IL-10指標(biāo)的檢測(cè)
　　 術(shù)后一周處死每組動(dòng)物，處死前心內(nèi)采血5ml，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)循環(huán)血血清細(xì)胞因子IL-6、IL-10水平反映炎癥的指標(biāo)。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 所有數(shù)據(jù)采用SP

5、SS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；等級(jí)資料組間比較采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗(yàn)分析，兩組間比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)分析。P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性。
　　 結(jié) 果
　　 1、血管組織標(biāo)本免疫組化結(jié)果
　　 光鏡下可見：核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp65呈棕黃色顆粒，胞核幾乎無染色；活化后進(jìn)

6、入核內(nèi)，表現(xiàn)為核染色?？瞻捉M幾乎沒有核染色；血管外膜損傷組術(shù)后7天可見血管壁細(xì)胞較多棕黃色細(xì)胞核；TXL治療組只見極少的棕黃色細(xì)胞核，明顯少于外膜組。外膜組NF-κBp65表達(dá)顯著強(qiáng)于對(duì)照組，差異顯著（u=3.67，p<0.05）；TXL組NF-κBp65表達(dá)同外膜組比較明顯下降，差異顯著（u=2.83，p<0.05）；TXL組同對(duì)照組比較沒有達(dá)到明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（u=1.77<1.96，p>0.05）。
　　 2、血清IL-6

7、、IL-10測(cè)定結(jié)果
　　 與空白組比較，外膜組血清IL-6，IL-10含量均增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；與外膜組比較，TXL組血清IL-6、IL-10含量均減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；與空白組比較，TXL組兩者血清表達(dá)均增加，但沒達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論
　　 1、血管外膜套管法致動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型成功又建，機(jī)制與炎癥相關(guān)因子NF-κB、IL-6、IL-10有關(guān)。