新一代長效干擾素的研發(fā)—干擾素-α的表達(dá)純化及活性測定.pdf

1、重組干擾素-α是一種具有抗病毒、抗細(xì)胞增殖和免疫調(diào)節(jié)等特性的藥物蛋白，已經(jīng)被證明并應(yīng)用于臨床治療多種病毒性疾病和癌癥。然而，它在人體內(nèi)半衰期非常短，給病人用藥帶來諸多不便。通過聚乙二醇修飾可延長干擾素-α的半衰期。本文中生產(chǎn)的干擾素，利用基因定點(diǎn)突變的方法在蛋白質(zhì)非活性位點(diǎn)插入一個(gè)游離的半胱氨酸殘基，通過這個(gè)半胱氨酸殘基將蛋白質(zhì)和聚乙二醇(末端含有與半胱氨酸反應(yīng)的活性基團(tuán))進(jìn)行共價(jià)連接。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是能產(chǎn)生具有高生物活性、單一位點(diǎn)修飾

2、的長效干擾素。
　　 由美國某生物技術(shù)公司提供的含有干擾素-α基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌W3110，IPTG誘導(dǎo)后干擾素以不溶的包涵體形式表達(dá)。實(shí)驗(yàn)探索和優(yōu)化了蛋白表達(dá)條件和包涵體蛋白體外稀釋復(fù)性的條件，以提高蛋白產(chǎn)率。采用陽離子交換層析(IEC)和疏水相互作用層析(HIC)的方法進(jìn)行目的蛋白的純化，輔之以非變性和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析純化產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)優(yōu)化了疏水層析的純化條件，使疏水層析兩個(gè)主峰分離度達(dá)到1.0以上。最后利用