北京油雞α-干擾素的克隆和表達研究.pdf

1、本論文以北京油雞肝臟總RNA作為模板，通過RT-PCR方法克隆α-干擾素目的基因片段連接到pGEM-T Easy載體上，構建北京油雞克隆載體，再利用雙酶切法構建北京油雞真核表達載體pEGFP-C1-α-IFN，并把真核表達載體轉染到蒙古馬和阿勒泰羊耳緣組織成纖維靶細胞中表達。所得試驗結果如下: 1.北京油雞肝臟提取的總RNA為模板，通過RT-PCR方法克隆出雞α-IFN基因，片段大小為582bp，并提交基因序列于GenBank獲

2、取收錄號。 2.采用組織塊貼壁培養(yǎng)法對蒙古馬和阿勒泰羊耳緣組織成纖維靶細胞進行原代、傳代培養(yǎng)及凍存，并對其進行細胞活率、生長曲線、微生物污染、染色體核型、同工酶酶譜和綠色熒光蛋白外源基因表達等鑒定，得到了細胞生長健康，形態(tài)良好，未受別種細胞污染，遺傳性能穩(wěn)定，外源基因轉染的細胞形態(tài)和生長狀態(tài)良好的靶細胞。 3.采用SalI、EcoRI雙酶切法建立了北京油雞pEGFP-Cl-α-IFN真核表達載體，并在靶細胞中的表達結果顯