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文檔簡介
1、 本研究通過rBovIFN-γ的原核表達及其真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建，以期研制rBovIFN-γ及其McAb，為進一步研究rBovIFN-γ及其McAb在牛病診斷、防制、治療及其相關(guān)研究中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1.rBovIFN-γ在大腸桿菌中的表達及其產(chǎn)物的鑒定 根據(jù)BovIFN-γ基因的已知序列，通過RT-PCR擴增出BovIFN-γ前體(PreBovIFN-γ)的cDNA序列(包含信號肽序列)，然后將其定向克隆入pVAX1質(zhì)粒中，構(gòu)
2、建重組質(zhì)粒pVAX1-PreBovIFN-γ。 通過PCR從重組質(zhì)粒中擴增出成熟BovIFN-γ的DNA序列，并將后者定向插入原核表達質(zhì)粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1，經(jīng)DNA測序確認后，分別轉(zhuǎn)化E.coliBL21和E.coliBL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，各自表達出大小在22KD和42KD左右的融合蛋白。本研究為進一步研究rBovIFN-γ單抗在研究牛免疫細胞功能、牛的免疫調(diào)控、牛疫病的致病機制及其診斷中的
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