EZH2在非小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:肺癌是目前我國(guó)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，其中非小細(xì)胞肺癌約占85％，化療是其主要的治療手段之一，然而肺癌對(duì)化療藥物極易產(chǎn)生耐藥性，肺癌的耐藥是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。EZH2引起的表觀(guān)遺傳學(xué)改變與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展和耐藥關(guān)系密切。為了研究EZH2在非小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥中的作用，本研究將檢測(cè)EZH2在人肺腺癌細(xì)胞株A549及其順鉑耐藥株A549/DDP中的表達(dá)差異，檢測(cè)EZH2與順鉑耐藥性、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的關(guān)系，以探討EZ

2、H2在非小細(xì)胞肺癌對(duì)順鉑耐藥中的作用及其調(diào)控機(jī)制。為肺癌耐藥的逆轉(zhuǎn)研究提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為肺癌耐藥的治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法:采用Real-time PCR檢測(cè)A549和A549/DDP中EZH2、P21、Bad和Puma的mRNA表達(dá)差異。采用RNA干擾技術(shù)抑制A549/DDP細(xì)胞中的EZH2表達(dá)。通過(guò)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)（CCK-8）檢測(cè)抑制EZH2表達(dá)后A549/DDP細(xì)胞耐藥性的改變。Real-time PCR檢測(cè)抑制E

3、ZH2表達(dá)后A549/DDP細(xì)胞中P21、Puma和Bad的表達(dá)變化。流式細(xì)胞儀檢測(cè)抑制EZH2表達(dá)后A549/DDP細(xì)胞周期的變化。
　　結(jié)果:
　　1．EZH2的mRNA在A(yíng)549/DDP中呈高表達(dá)，其相對(duì)表達(dá)量為A549的（1.97±0.02）倍，P﹤0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2．A549/DDP中P21、Puma、Bad的mRNA均呈低表達(dá)。P21、Puma差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)，而B(niǎo)ad無(wú)統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)差異（P﹥0.05）。
　　3．抑制EZH2表達(dá)后，順鉑對(duì)A549/DDP的IC50由（34.57±3.70）μ mol/L降低至（18.91±2.07）μ mol/L，P﹤0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示細(xì)胞耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn)。
　　4．抑制EZH2表達(dá)后，A549/DDP中P21、Puma、Bad的mRNA表達(dá)均上調(diào)，三者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。說(shuō)明EZH2對(duì)上述基因具有抑制作用。
　　5．抑制A549/D

5、DP細(xì)胞EZH2表達(dá)后，G0/G1期細(xì)胞比例下降，G2/M期細(xì)胞增多（P﹤0.05），細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯。
　　結(jié)論:
　　1．A549/DDP中EZH2表達(dá)升高，特異性抑制EZH2表達(dá)可使其對(duì)順鉑的耐藥性下降，提示EZH2參與介導(dǎo)了A549/DDP對(duì)順鉑的耐藥。
　　2．抑制EZH2表達(dá)后可使A549/DDP中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Puma、Bad的表達(dá)上調(diào)，表明EZH2可能通過(guò)調(diào)控與上述基因相關(guān)的凋亡通路誘導(dǎo)A549