PARP1-ERCC1在rH-Apo2L逆轉(zhuǎn)人非小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥的作用.pdf

1、目的:
　　通過細(xì)胞學(xué)實驗，探討rh-Apo2L能否逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥;探討rh-Apo2L逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥是否與PARP1、ERCC1有關(guān);通過免疫組化技術(shù)探討ERCC1、PARP1蛋白表達(dá)對患者生存預(yù)后的預(yù)測作用。
　　方法:
　　1.采用回顧性分析的方法，對81例非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)用免疫組織化學(xué)PV9000二步法，檢測入組病例的ERCC1、PARP1的表達(dá)，運(yùn)用SPSS16.0軟件對ERCC1、PARP1表達(dá)與臨床病理參數(shù)

2、、生存預(yù)后相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　2.采用mtt法檢測不同濃度的rh-Apo2L、順鉑干預(yù)A549/DDP細(xì)胞24、48h后，各組細(xì)胞的增殖情況，并計算藥物半數(shù)抑制濃度(IC50)。
　　3.采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測藥物干預(yù)A549/DDP細(xì)胞24h后，各組細(xì)胞凋亡率的變化。實驗分為空白對照組、rh-Apo2L組、順鉑組、聯(lián)合給藥組。相應(yīng)組別藥物分別干預(yù)A549/DDP細(xì)胞24h。
　　4.采用免疫熒光檢測ERCC1、

3、PARP1在A549/DDP中分布位置及相對表達(dá)量。
　　5.采用RT-PCR技術(shù)檢測各組藥物干預(yù)A549/DDP細(xì)胞24h、48h后，ERCC1、PARP1mRNA的變化。
　　6.采用Western blot技術(shù)檢測各組藥物干預(yù)A549/DDP細(xì)胞24h、48h后，ERCC1、PARP1蛋白的變化。
　　結(jié)果:
　　1.81例非小細(xì)胞肺癌患者組織樣本中ERCC1、PARP1蛋白表達(dá)永平與患者各臨床病理參數(shù)如:

4、性別、年齡、吸煙狀況、病理類型、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無關(guān)。
　　2.ERCC1陰性表達(dá)組術(shù)后總生存期優(yōu)于ERCC1陽性表達(dá)組，統(tǒng)計分析兩組間總生存期（48.8月VS44.7月P=0.291），無顯著統(tǒng)計學(xué)差異，兩組間無進(jìn)展生存期差異不具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(34.1月VS25.1月，P=0.016)。PARP1陰性表達(dá)組術(shù)后總生存期優(yōu)于PARP1陽性表達(dá)組，統(tǒng)計分析兩組間總生存期（49.6月VS44月P=0.088），無顯著統(tǒng)計學(xué)差異

5、，但兩組間無進(jìn)展生存期差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(36.2月VS23.5月，P＜0.001)。
　　3.(1) rh-Apo2L、順鉑在體外對A549/DDP細(xì)胞均具有一定的增值抑制作用，并呈濃度依賴性。rh-Apo2L對A549/DDP細(xì)胞的24h、48h半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為397.1μg/ml、287.0μg/ml，順鉑對A549/DDP細(xì)胞的24h、48h半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為139.17μg/ml、99.06

6、μg/ml;(2)兩藥聯(lián)合干預(yù)對A549/DDP細(xì)胞的生長抑制作用較單藥組強(qiáng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，兩藥相互作用指數(shù)為0.611，提示兩藥聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。(3) rh-Apo2L聯(lián)合順鉑干預(yù)A549/DDP細(xì)胞24h后，其凋亡率為(54.13±7.02％)，與rh-Apo2L(12.8±1.82％)、順鉑(13.03±8.38％)單藥組相比，細(xì)胞凋亡率顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

7、>　　4.ERCC1及PARP1在A549/DDP中明顯表達(dá)，主要位于細(xì)胞核內(nèi)。
　　5.rh-Apo2L聯(lián)合順鉑作用于A549/DDP細(xì)胞可下調(diào)ERCC1、PARP1 mRNA水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　6.rh-Apo2L聯(lián)合順鉑作用于A549/DDP細(xì)胞可下調(diào)ERCC1、PARP1蛋白水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.PARP1與非小細(xì)胞肺癌患者的DFS相關(guān)。<