氯硝柳胺逆轉(zhuǎn)肺癌細(xì)胞順鉑耐藥作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]：
　　研究氯硝柳胺對肺癌細(xì)胞的增殖抑制及其逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥作用，并初步探討其可能的分子機(jī)制。
　　[方法]：
　　1、采用CCK-8法檢測氯硝柳胺對人肺癌細(xì)胞A549、A549/DDP增殖的影響。用不同濃度氯硝柳胺（0、0.125、0.25、0.5、1、2、4umol/L）及不同濃度的順鉑(0、1.25、2.5、5、10、20、40ug/ml)分別作用于肺癌細(xì)胞24 h后，用CCK-8測定其細(xì)胞增殖率并計(jì)算耐藥指

2、數(shù)。選用氯硝柳胺（0.5和1umol/L）與不同濃度的順鉑(0、1.25、2.5、5、10、20ug/ml)聯(lián)合作用于A549以及A549/DDP24h后，測定其細(xì)胞增殖率并計(jì)算逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥倍數(shù)。
　　2、采用AnnexinⅤ/PI雙染色法檢測細(xì)胞凋亡，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測不同處理組細(xì)胞凋亡的變化;實(shí)驗(yàn)分為對照組、順鉑組、氯硝柳胺組、聯(lián)合組，當(dāng)細(xì)胞長至約50～60％融合度時(shí)，換用含或不含氯硝柳胺（1umol/L），順鉑(2.5ug/m

3、l)的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h和36h后，用流式細(xì)胞儀檢測藥物處理后細(xì)胞凋亡情況;
　　3、采用蛋白免疫印跡檢測在肺癌耐藥細(xì)胞A549/DDP中，藥物單獨(dú)及聯(lián)合作用24h后凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和caspase-3的表達(dá)水平以及耐藥相關(guān)蛋白LRP和c-myc的表達(dá)水平的變化。
　　[結(jié)果]：
　　氯硝柳胺抑制肺癌細(xì)胞的增殖并有逆轉(zhuǎn)肺癌細(xì)胞順鉑耐藥的作用;氯硝柳胺聯(lián)合順鉑組的細(xì)胞凋亡比例及凋亡相關(guān)蛋白caspase-3表達(dá)水平明