五甲基槲皮素抗糖尿病大鼠腎臟纖維化的作用及機制研究.pdf

1、五甲基槲皮素是多甲氧基黃酮類化合物中的一員,主要存在于沙棘果實及山奈屬植物的根莖中。本實驗室以槲皮素為原料,采取全甲基化的方法,成功合成了五甲基槲皮素,解決了其天然來源較為困難的問題,為研究其藥理學作用提供了保障。我們的前期實驗已證明,五甲基槲皮素的藥效學作用有:改善乳鼠腹腔注射鏈脲佐菌素誘導的糖尿病模型的高血糖癥狀,上調3T3-L1前脂肪細胞脂聯(lián)素水平,阻止心肌肥大以及改善代謝綜合征等。同時,我們發(fā)現(xiàn),五甲基槲皮素不僅可以改善糖尿病大

2、鼠的高血糖癥狀,還能夠有效地減少尿量。由此,我們試圖探究其對糖尿病條件下腎臟的作用,尤其關注糖尿病腎病中最為典型的腎臟纖維化的病理變化。因此,本課題根據(jù)文獻報道,選擇了癥狀與糖尿病人相似的,自發(fā)型II型糖尿病GK大鼠為動物模型,探討五甲基槲皮素對該模型腎臟纖維化的作用。同時,采用高糖誘導腎小球系膜細胞,模擬糖尿病時的體內環(huán)境,在細胞水平進一步研究五甲基槲皮素抗腎臟纖維化的作用及可能的機制。
　　目的:研究PMQ對自發(fā)型II型糖尿病

3、GK大鼠腎臟纖維化及高糖培養(yǎng)的系膜細胞纖維化指標的作用,并探討其可能的作用機制。
　　方法:(1)在整體動物中,12周齡的雄性GK大鼠隨機分為5組:GK大鼠模型組,PMQ5、10、20mg/kg組,陽性藥二甲雙胍300mg/kg組,同齡的雄性Wistar大鼠作為對照組,每組7-9只。每周對各組大鼠體重、飲水及進食情況進行監(jiān)測。給藥后15周檢測各組大鼠空腹及餐后血糖、胰島素水平,以及空腹甘油三酯和總膽固醇水平。給藥16周后,進行口服

4、糖耐量實驗。實驗結束前,監(jiān)測各組大鼠24h尿量、尿糖、尿白蛋白、肌酐及尿素氮水平,并計算尿白蛋白排泄率。實驗結束時,摘取兩側腎臟稱重,并結合體重計算腎臟指數(shù);通過對腎臟的PAS及Masson染色進行病理學檢測。同時,在mRNA及蛋白水平上,檢測纖維化相關因子纖粘蛋白及IV型膠原的表達情況。(2)在細胞水平上,采用高糖培養(yǎng)系膜細胞,并加入PMQ1、3或10μM或卡托普利100μM干預48h后,進行后續(xù)實驗。分別采用CM-DiI染色檢測細胞

5、大小,MTT法檢測細胞增殖及天狼星紅染色法檢測膠原總量;同時,在mRNA及蛋白水平上,檢測纖維化相關因子纖粘蛋白及IV型膠原的表達情況。(3)檢測在各組大鼠腎臟組織及高糖誘導各組的系膜細胞中TGF-β1、Smad7、Smad2/3及p-Smad2/3mRNA與蛋白水平表達情況。
　　結果:(1)在整體動物上,與GK大鼠相比,PMQ給藥組在以下幾方面具有改善作用:a.改善糖脂代謝,胰島素抵抗及糖耐量受損情況。b.改善多尿癥狀,降低尿

6、糖水平及腎臟指數(shù)。c.減輕腎小球肥大及糖原沉積。d.在mRNA及蛋白水平,降低纖粘蛋白及IV型膠原的表達。(2)在細胞水平上,與高糖組相比,PMQ給藥組可抑制高糖導致的系膜細胞過度增殖,細胞肥大以及總膠原的積累,在mRNA及蛋白水平,降低纖粘蛋白及IV型膠原的表達。(3)在大鼠腎臟組織及系膜細胞中,與模型組相比,在mRNA及蛋白水平上,給予PMQ后,可降低其TGF-β1及Smad2/3磷酸化的水平,升高Smad7的表達。
　　結論