骨保護(hù)素對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　 糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Dialbetes Mellitus，DM)常見(jiàn)的嚴(yán)重微血管并發(fā)癥，是DM的主要死亡原因之一，大約20％-30％的2型糖尿病患者會(huì)出現(xiàn)糖尿病腎病，1型糖尿病出現(xiàn)糖尿病腎病的機(jī)率會(huì)更高，目前DN已成為終末期腎病(End stage renal disease，ESRD)的主要原因。DN發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚未完全清楚，目前認(rèn)為是多因素如糖代謝紊亂及其所導(dǎo)

2、致的血流動(dòng)力學(xué)改變、細(xì)胞因子、炎癥因子等綜合作用的結(jié)果。DM病人一旦進(jìn)入臨床DN期即蛋白尿期，隨著病程的進(jìn)展就會(huì)出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿、水腫、高血壓、腎小球?yàn)V過(guò)率下降、腎功能下降等臨床表現(xiàn)，病程不可逆轉(zhuǎn)，最終發(fā)展成終末期腎病，治療極為困難，并有極高的致殘率和致死率，所以早期對(duì)糖尿病腎病進(jìn)行干預(yù)極為重要。
　　 腎小球內(nèi)皮細(xì)胞(Glomemlar Endothelial Cells，GECs)在腎小球?yàn)V過(guò)過(guò)程中起著重要的生理作用，在腎小球

3、疾病的形成過(guò)程中扮演著重要的角色，腎小球血管內(nèi)皮細(xì)胞是高血糖首當(dāng)其沖的靶細(xì)胞，蛋白尿出現(xiàn)便是糖尿病腎臟微血管功能和結(jié)構(gòu)的異常表現(xiàn)，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞又稱腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞，是腎小球?yàn)V過(guò)屏障的重要組成部分之一，承受著遠(yuǎn)高于一般毛細(xì)血管的血壓。血流動(dòng)力學(xué)的變化極易損傷腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，另外血液中的致病因子如高血糖及局部的腎素.血管緊張素因子也非常容易損害血管內(nèi)皮層，DN的發(fā)生、發(fā)展與血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能障礙密切相關(guān)，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞損傷后可激活多種炎

4、癥因子如單核細(xì)胞趨化因子(Monocytechemoattractant protein-1MCP-1)，引起炎癥細(xì)胞滲入腎小球，導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度降低，從而導(dǎo)致腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。因此如何減少腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的損傷成為目前研究的熱點(diǎn)之一。
　　 新近研究表明骨保護(hù)素(osteoprotegerin，OPG)具有抗內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞成熟等作用，從理論上可能對(duì)糖尿病腎臟病變有一定的改善作用，但動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)卻很少有

5、人研究，本研究通過(guò)建立DN大鼠模型，觀察OPG對(duì)糖尿病腎病大鼠模型24小時(shí)尿蛋白定量、血肌酐等生化指標(biāo)及腎臟病理形態(tài)的改變并探討這一機(jī)制，為進(jìn)一步了解DN的發(fā)病機(jī)制及對(duì)糖尿病腎病進(jìn)行早期干預(yù)提供理論依據(jù)
　　 目的：
　　 (1)通過(guò)長(zhǎng)期高脂飲食誘導(dǎo)及鏈尿佐菌素法構(gòu)建糖尿病腎病大鼠模型，觀察OPG對(duì)糖尿病腎病大鼠基本狀況的改善和腎臟病變的延緩作用。
　　 (2)觀察OPG對(duì)糖尿病腎病大鼠CD34(代表腎小球內(nèi)皮細(xì)

6、胞密度)和MCP-1表達(dá)的影響來(lái)探討其改善和延緩糖尿病腎臟病變的的機(jī)制。
　　 方法：
　　 選擇Wistar大鼠，給予8周高脂飲食后再給予小劑量鏈尿佐菌素一次性腹腔注射建立DN大鼠模型，將DN大鼠模型隨機(jī)分為2組：DN模型組(n=15)、OPG干預(yù)組(n=15)，另設(shè)正常對(duì)照組(n=15)。OPG干預(yù)組每日給予8ug/kg體重的OPG加生理鹽水1ml腹腔注射一次；正常對(duì)照組和DN模型組每日以等量生理鹽水腹腔注射。各組大

7、鼠分籠喂養(yǎng)，全部大鼠自由進(jìn)食，隨意飲水，自然照明。10周后，觀察各組大鼠基本狀況及體重；檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量；處死大鼠，心臟穿刺取血，離心分離血清，測(cè)定血糖、血肌酐和尿素氮等指標(biāo)；取雙腎，稱雙腎重量計(jì)算腎臟肥大指數(shù)(腎重/體重)；顯微鏡下觀察各組大鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)改變(Masson染色，PASM染色)；檢測(cè)各組大鼠腎組織腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度(CD34表達(dá)情況)和MCP-1的表達(dá)情況(免疫組織化學(xué)法)。
　　 結(jié)果：
　　

8、 (1)DN模型組體重為(323.54±25.16g)、腎臟肥大指數(shù)為(0.64±0.01)、血糖為(19.75±1.87mmol/L)、24小時(shí)尿蛋白為(60.24±4.99mg/L)、肌酐為(37.46±11.99umol/L)、尿素氮為(19.82±4.26mmol/L)，而OPG干預(yù)組體重、腎臟肥大指數(shù)、血糖、24小時(shí)尿蛋白、肌酐、尿素氮分別為(411.33±28.79g)、(0.48±0.05)、(20.81±2.04mmol

9、/L)、(38.37±5.24mg/L)、(28.20±5.12umol/L)、(13.90±3.44mmol/L)，與DN模型組相比，OPG干預(yù)組大鼠血肌酐和尿素氮、腎臟肥大指數(shù)明顯減低、24小時(shí)尿蛋白定量減少(P<0.01)，而血糖無(wú)明顯改變；
　　 (2)DN模型組腎小球硬化指數(shù)為(3.93±0.64)、腎小管間質(zhì)病變積分為(0.41±0.09)、而OPG干預(yù)組腎小球硬化指數(shù)、腎小管間質(zhì)病變積分分別為(2.15±0.52)

10、、(0.34±0.07)，與DN模型組相比，OPG干預(yù)組光鏡下腎臟組織病理形態(tài)如腎小球硬化指數(shù)和腎小管間質(zhì)病變積分變化明顯好轉(zhuǎn)(P<0.01和P<0.05)；
　　 (3)DN模型組腎組織腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度(CD34+免疫組化染色)為(2.45±0.43)，而OPG干預(yù)組腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度(CD34+免疫組化染色)為(5.13±0.58)，與DN模型組相比，腎組織腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度增加(P<0.01)；
　　 (4)DN

11、模型組腎組織MCP-1的表達(dá)為(4.73±0.86)，而OPG干預(yù)組腎組織MCP.1的表達(dá)為(3.78±0.44)，與DN模型組相比，腎組織MCP.1的表達(dá)減少(P<0.01)；
　　 (5)腎組織腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度(CD34免疫組化染色)與24小時(shí)尿蛋白定量、腎小球硬化指數(shù)和腎小管間質(zhì)病變積分成負(fù)相關(guān)(P<0.01)；
　　 (6)腎組織腎小球內(nèi)皮細(xì)胞密度和腎組織MCP-1的表達(dá)成負(fù)相關(guān)(P<0.01)。