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1、目的:糖尿病腎病(DN)是導(dǎo)致終末期腎衰的主要原因之一。研究證明,在糖尿病持續(xù)高糖狀態(tài)下,氧自由基生成增多在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。普羅布考是一種降脂抗氧化劑,在降低TC、TG、LDL-C的同時(shí),HDL-C有輕度降低。同時(shí),作為一種抗氧化劑具有重要的機(jī)體保護(hù)作用。本研究旨在觀察普羅布考對(duì)糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激反應(yīng)和腎臟α-SMA、CTGF、TGF-β、FN的影響及其機(jī)制,探討其對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用。 方法:健康的
2、SD(sprague-Dawley)雄性大鼠36只,隨機(jī)分成兩組:E組(正常對(duì)照組,喂養(yǎng)普通飼料,10只),C組(喂養(yǎng)高糖高脂飲食,26只),8周后測(cè)量血脂、血糖和血胰島素,并將C組注射STZ造模,血糖測(cè)定結(jié)果>16.67mmol/l為2型糖尿病造模成功。結(jié)果成模23只,將其重新分組:A組12只,B組(成模后予普羅布考500mg/kg/d干預(yù)8周組,11只),A、B組大鼠繼續(xù)予高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周,E組10只不變,繼續(xù)予普通飼料喂養(yǎng)8周
3、,后處死。各組大鼠處死前留取24小時(shí)尿液,檢測(cè)24h尿微量蛋白定量(UMA)。股動(dòng)脈取血測(cè)肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、甘油三醋(TG)、總膽固醇(TC)。取左腎稱重,計(jì)算腎臟肥大指數(shù)(KW/BW)。取部分腎組織制備組織勻漿,測(cè)腎皮質(zhì)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的變化。部分腎組織采用10%福爾馬林固定,石蠟切片,觀察腎臟的病理改變,并用免疫組化方法和計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)研究腎臟TG
4、F-β1、FN、α-SMA的表達(dá)水平,同時(shí)電鏡下觀察腎臟的超微病理改變。剩余組織置于液氮中,RT-PCR方法檢測(cè)CTGF、TGF-β1、α-SMAmRNA表達(dá)量。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。 結(jié)果:(1)高糖高脂飲食8周后,STZ誘導(dǎo)2型糖尿病造模的成功率為88.46%。(2)高脂高糖喂養(yǎng)加小劑量STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血糖、血脂較常規(guī)飼料喂養(yǎng)組明顯增高,胰島素抵抗指數(shù)升高,符合2型糖尿病發(fā)病特點(diǎn)。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)A
5、組大鼠血清的TG、TC、LDL-C水平明顯高于E組,其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B組大鼠的TC、LDL-C水平顯著低于A組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)各組大鼠UMA和KW/BW的變化:A和B組的24hUMA水平明顯高于E組(P<0.05),其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組的24hUMA水平較A組明顯降低(P<0.05)。A和B組的KW/BW明顯高于E組(P<0.05),而A組、B組之間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.
6、05)。(5)腎皮質(zhì)氧化還原指標(biāo)的變化:A組大鼠腎皮質(zhì)SOD、GSH-PX活性較E組顯著降低(P<0.05),MDA含量顯著升高(P<0.05);普羅布考干預(yù)后B組SOD、GSH-PX活性較A組升高,MDA含量較A組顯著下降,兩組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。(6)A組大鼠腎小球內(nèi)TGF-β1、α-SMA、FN蛋白表達(dá)較E組顯著增加(P<0.05),CTGF、TGF-β1和α-SMAmRNA的表達(dá)較E組顯著增加(P<0.05),普
7、羅布考干預(yù)后各組蛋白和mRNA表達(dá)均較A組明顯減少。(7)糖尿病組腎小球基膜增厚,系膜基質(zhì)增多,足細(xì)胞足突嚴(yán)重融合、脫落;B組足突融合嚴(yán)重程度介于E組和A組之間。 結(jié)論:(1)高糖高脂飲食加小劑量多次注射STZ可以成功誘導(dǎo)SD大鼠的T2DM模型,方法簡(jiǎn)單且成模率高;(2)糖尿病時(shí)腎組織抗氧化能力降低、氧化應(yīng)激增高,可能導(dǎo)致腎小球上皮細(xì)胞和腎小管間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)型分化增加,同時(shí)CTGF、TGF-β1、α-SMA、FN表達(dá)增加,腎臟肥大、
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