五甲基槲皮素對豚鼠心肌收縮力和電生理特性的作用及機制研究.pdf

1、黃酮類的植物多酚一直受到醫(yī)藥界的高度關(guān)注，其中對槲皮素(QUE)的研究最深入，已證實的生物活性包括強心、擴血管、降血壓、抗氧化、抑制脂質(zhì)過氧化、抑制血小板聚集、抗炎、保護缺血再灌注損傷、抗腫瘤等作用。但QUE生物利用度低，半衰期短、效價低等缺點防礙了其開發(fā)利用。
　　 多甲氧基黃酮是多酚類黃酮的甲基衍生物，具有明顯的藥代學特點和藥效學優(yōu)勢。但天然多甲氧基黃酮的提取工藝至今無重大突破，得量有限，價格昂貴，使深入研究難以進行，我們對

2、QUE進行了甲基化改造，獲得高純度低價位的五甲基槲皮素（PMQ），克服了藥源的瓶頸。本實驗擬比較研究PMQ和QUE對離體豚鼠心肌收縮力和電生理特性的影響并探討其作用機制。
　　 第一部分：五甲基槲皮素對離體豚鼠心房肌生理特性的影響
　　 記錄離體心房肌收縮張力，觀察五甲基槲皮素對離體豚鼠左心房肌收縮性及右心房自律性的影響。結(jié)果表明：0.1%DMSO對各指標均無明顯作用。10，30，100 μmol·L-1 PMQ分別使左

3、心房收縮力增加9±3%(n=9,P>0.05)，24±7%(P<0.05)，29±12%(P<0.05)。相同濃度的QUE分別使左心房收縮力增加12±2%(n=9，P<0.05)，15±3%（P<0.01)，32±9%（P<0.01)。PMQ有降低右心房自律性的趨勢，但與溶劑組（DMSO）比較無統(tǒng)計學意義。10，30，100 μmol·L-1 QUE濃度依賴性地增加右心房自動頻率8±1%(n=7,P>0.05),15±2%（P<0.05

4、)，24±2%（P<0.01)。
　　 第二部分：五甲基槲皮素對離體豚鼠心乳頭肌動作電位和收縮力的作用
　　 同步記錄豚鼠右心室乳頭肌動作電位和收縮力，觀察五甲基槲皮素(PMQ)對其影響。結(jié)果表明：0.1%DMSO對動作電位各個指標均無明顯作用。10 μmol·L-1 QUE分別使APD20，APD50，APD90延長9±3%，7±1%，6±1%（n=8,P<0.01），30 μmol·L-1QUE分別使APD20，AP

5、D50，APD90延長7±3%，7±1%，6±1%（n=8,P<0.01）。10，30 μmol·L-1 QUE 分別使乳頭肌收縮力增加11±3%，47±8%（n=8,P<0.01）。30，100 μmol·L-1 PMQ分別使乳頭肌收縮力增加13±3%，24±6%（n=7，P<0.01），對動作電位各指標均無明顯影響。
　　 第三部分：五甲基槲皮素對豚鼠心室肌細胞鈣、鉀電流的影響
　　 一、五甲基槲皮素對豚鼠心室肌細胞

6、L型鈣電流（Ica.L）的影響
　　 采用酶解法制備單個心室肌細胞，應(yīng)用全細胞膜片鉗記錄方法，在電壓鉗模式下記錄心室肌細胞Ica.L。結(jié)果表明，10 μmol·L-1和30 μmol·L-1 QUE均可抑制Ica.L峰值，抑制率分別為12±3%（n=8,P<0.01）和18±5% (n=6,P<0.05)。10 μmol·L-1 PMQ對Ica.L峰值無明顯影響，濃度升至30 μmol·L-1后可見Ica.L被抑制，抑制率為20

7、±3%（n=7，P<0.01），洗脫后可部分恢復(fù)。10 μmol·L-1 QUE分別使激活V1/2和K值（slope factor）從-11.1±0.60 mV和5.61±0.23變化至-18.7±1.00 mV和4.90±0.37（P<0.05）。30 μmol·L-1QUE使 V1/2 從-11.9±0.78 mV變化至-21.4±0.51mV（P<0.01），K值從6.30±0.24變化至6.21±0.43（P>0.05）。PMQ

8、濃度高達30 μmol·L-1不改變Ica.L的最大激活電壓，給藥前V1/2和K值為-13.3±1.72mV，5.55±0.20，用藥后為-14.3±2.04 mV和5.40±0.56（P>0.05）。
　　 二、五甲基槲皮素對豚鼠心室肌細胞內(nèi)向整流鉀電流（IK1）的影響
　　 應(yīng)用全細胞膜片鉗記錄方法，在電壓鉗制下記錄藥物對豚鼠心室肌細胞內(nèi)向整流鉀電流的作用。結(jié)果表明，0.1%DMSO對IK1無明顯作用。10、30 μ

9、mol·L-1 QUE均明顯抑制IK1，抑制率分別為25±6%（n=6,P<0.01），37±4%（n=6,P<0.01），洗脫后可部分恢復(fù)。10 μmol·L-1PMQ對IK1無明顯作用，濃度升至30 μmol·L-1PMQ方見其抑制IK1，抑制率為18±2%（n=7,P<0.01），作用強度明顯低于QUE。
　　 第四部分：五甲基槲皮素對豚鼠心室肌細胞內(nèi)游離鈣濃度的影響
　　 應(yīng)用酶解法制備單個心室肌細胞，F(xiàn)luo-

10、3負載細胞，采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)游離鈣的測定技術(shù)測定豚鼠心室肌細胞內(nèi)游離鈣[Ca2+]I。結(jié)果顯示，1μmol·L-1 PMQ不影響心室肌細胞內(nèi)游離鈣濃度，3 μmol·L-1與30 μmol·L-1 PMQ均可明顯增加豚鼠心室肌細胞內(nèi)游離鈣[Ca2+]I，增加幅度分別為72±16%，122±24%（n=7,P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 (1)PMQ與QUE均增強豚鼠左心房收縮力，二者作用相近。PM