HD-Ⅰ對(duì)乙型病毒性肝炎的免疫調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒感染(HBV)是我國(guó)最常見(jiàn)的傳染性疾病之一，正常人群感染率在10％以上，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康和生命，大約25％到40％的慢性乙肝病人最終死于肝炎導(dǎo)致的肝硬化或者肝癌。目前治療乙型肝炎的靶向主要有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和保肝降酶三種方法。西藥治療乙肝療效確定的是干擾素和拉米夫定，但因治療后易復(fù)發(fā)及價(jià)格昂貴等原因不能很好的滿(mǎn)足臨床需要。因此迫切需要研究和開(kāi)發(fā)新的治療肝炎的藥物。 乙型肝炎患者體內(nèi)的免疫反應(yīng)極其復(fù)雜。最近幾

2、年的研究表明，機(jī)體非特異性免疫和特異性免疫(體液免疫和細(xì)胞免疫)反應(yīng)的強(qiáng)弱是決定HBV感染是否最終發(fā)病的主要因素，機(jī)體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)也是引起肝組織損傷的最主要原因，尤其細(xì)胞免疫反應(yīng)在HBV感染的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。激活的T淋巴細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞因子，激活炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞，產(chǎn)生化學(xué)趨化因子，動(dòng)員和激活周?chē)募?xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和抗原非特異性T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致壞死性炎癥的發(fā)生、肝細(xì)胞的凋亡和最終的肝損傷。因此從免疫角度探索有效的抗

3、肝損傷的藥物，對(duì)于病毒性肝炎的防治以及慢性化的逆轉(zhuǎn)具有重大意義。 中藥胡黃連善除濕熱、消積聚，補(bǔ)肝膽，助除疫毒，治療肝炎有著深厚的中醫(yī)理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。HD-I是從中藥胡黃連中提取出的苷類(lèi)單體化合物，前期研究表明其能抑制四氯化碳、D-氨基半乳糖誘導(dǎo)的化學(xué)性肝損傷。本研究針對(duì)患者體內(nèi)病毒復(fù)制、機(jī)體非特異性免疫、特異性免疫(體液免疫和細(xì)胞免疫)等方面的變化，選擇相近的肝損傷模型，探討HD-I的抗病毒作用及免疫調(diào)節(jié)作用。

4、 方法：分別建立鴨乙型病毒性肝炎模型及三種不同的免疫性肝損傷動(dòng)物模型，以分光光度計(jì)法檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、白蛋白(albumin，ALB)、總蛋白(total protein，TP)、唾液酸(sialicacid，SA)；斑點(diǎn)雜交法測(cè)鴨血清中鴨乙型肝炎病毒(duck hepatiti

5、s B virus，DHBV)DNA含量；酶聯(lián)免疫吸附分析(Enz yme-linked immunos orbent assay，ELISA)測(cè)鴨血清中前S表面抗原(duck hepatitis B pre-surface antigen，DHBpresAg)含量；聚乙二醇沉淀法測(cè)血清中循環(huán)免疫復(fù)合物(Circulating immune complex，CIC)含量；補(bǔ)體50％溶血法(compl ement hemo1ysis 50

6、％，CH5O)測(cè)補(bǔ)體含量；放射免疫法測(cè)血清中腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor alpha，TNF-α)含量；免疫組織化學(xué)法觀測(cè)肝細(xì)胞細(xì)胞間粘附分子(intercellu1ar adhesion molecule-l，ICAM-1)的表達(dá)。并取肝臟、脾臟、胸腺，稱(chēng)重計(jì)算臟器指數(shù)。HE染色法對(duì)肝臟組織做病理組織學(xué)檢查。 結(jié)果：(1)HD-I(10、20、40mg/Kg)靜脈注射給藥能降低鴨乙型肝炎動(dòng)物模型血

7、清中異常升高的DHBV-DNA、DHBpresAg水平，對(duì)鴨乙肝病毒具有較顯著的抑制作用，且抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性。(2)HD-I(5、10、15mg/Kg)靜脈注射給藥能明顯降低BCG+LPS免疫性肝損傷、異種免疫性肝損傷、ConA免疫性肝損傷小鼠血清中異常升高的轉(zhuǎn)氨酶水平，且降低酶值的作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性；病理檢查也發(fā)現(xiàn)其可明顯減輕肝組織壞死范圍及程度、減少炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但對(duì)肝臟指數(shù)影響不明顯。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在BCG+LPS免疫性肝損

8、傷、異種免疫性肝損傷模型中，HD-I中、高劑量組可增加白蛋白、總蛋白含量，糾EA/G比值。(3)在異種免疫性肝損傷模型中，HD-I能升高動(dòng)物體內(nèi)補(bǔ)體含量，提高機(jī)體清除循環(huán)免疫復(fù)合物的能力，調(diào)節(jié)機(jī)體的體液免疫功能。(4)在ConA免疫性肝損傷模型中，HD-I可降低血清中升高的TNF-α水平，減弱肝細(xì)胞ICAM-l的表達(dá)，調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。 結(jié)論：HD-I能明顯減少DHBV-DNA及DHBpresAg含量，具有抗乙肝病毒作