高產(chǎn)谷胱甘肽酵母菌選育及發(fā)酵條件優(yōu)化研究.pdf

1、本文以實(shí)驗(yàn)室保藏的一株釀酒酵母zf(2-10515)為出發(fā)菌株，利用NTG誘變篩選GSH高產(chǎn)菌株，確定了NTG誘變的最佳濃度為0.6mg/mL，此濃度下的致死率和正突變率分別為54.3％和5.9％。經(jīng)四次連續(xù)的NTG誘變，篩選得到四株GSH高產(chǎn)菌株，分別為Yzf(2-10515)-1，Yzf(2-10515)-2，Yzf(2-10515)-3，Yzf(2-10515)-4。其中突變株Yzf(2-10515)-1GSH產(chǎn)量最高，經(jīng)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

2、測(cè)得其干細(xì)胞內(nèi)GSH含量為0.88％，生物量為7.8g/L，其中干細(xì)胞內(nèi)GSH含量較出發(fā)菌株提高了576.92％。菌株Yzf(2-10515)-1斜面連續(xù)傳10代，GSH產(chǎn)量?jī)H下降0.4％，生物量下降了1.3％，說(shuō)明該突變株具有良好的穩(wěn)定性。 在搖瓶中對(duì)誘變后的突變株Yzf(2-10515)-1的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。 本文選用麥芽汁培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，麥芽汁的濃度為10°Be'。在此基礎(chǔ)上利用單因素試驗(yàn)確定了最

3、佳的碳源為葡萄糖，氮源為(NH4)2SO4，前體氨基酸為L(zhǎng)-cys·HCl，生長(zhǎng)因子的添加對(duì)GSH的產(chǎn)量無(wú)顯著影響。運(yùn)用Box-Benhnken的中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析，對(duì)該菌株產(chǎn)GSH的培養(yǎng)基組成進(jìn)行多項(xiàng)式回歸模型建立和最優(yōu)化，在此基礎(chǔ)上確定了該突變株產(chǎn)GSH的最佳培養(yǎng)基組成：葡萄糖38g、(NH4)2SO46.3g、L-cys·HCl1.9g、10°Be'的麥芽汁1000mL，pH自然。以此培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，繼續(xù)添加合成GSH的前體氨

4、基酸，最終確定發(fā)酵培養(yǎng)基的組成：葡萄糖38g、(NH4)2SO46.3g、L-cys·HCl1.9g、谷氨酸5g、10°Be'的麥芽汁1000mL，pH自然。 利用單因素試驗(yàn)確定菌株Yzf(2-10515)-1產(chǎn)GSH的最佳發(fā)酵條件為：種子培養(yǎng)20h后接種，培養(yǎng)溫度32℃，發(fā)酵液初始pH3.5，搖床轉(zhuǎn)速140rpm，接種量20％，裝液量100mL/500mL。在優(yōu)化后的培養(yǎng)基和最佳發(fā)酵條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)發(fā)酵之后GSH產(chǎn)量和