高產(chǎn)谷胱甘肽菌株的選育及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、谷胱甘肽(glutathione)是自然界廣泛存在的生物活性三肽，是L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸的縮合物。GSH有多種重要生理功能，因此它在臨床治療、食品、保健和體育等領(lǐng)域的應(yīng)用非常廣泛。雖然國內(nèi)也開始了有關(guān)研究和工業(yè)化生產(chǎn)，但是由于國產(chǎn)GSH的產(chǎn)量和純度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如國外產(chǎn)品，于是國外GSH產(chǎn)品壟斷我國市場的局面始終沒有改變。在這種背景下，本文對(duì)提高本實(shí)驗(yàn)室保藏的畢赤酵母菌(Pichia pastoris)Y的GSH產(chǎn)量進(jìn)行了研究。

2、r>　　初始菌株畢赤酵母Y的GSH產(chǎn)量為81.43mg/L。以Y為出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行紫外線、亞硝酸、亞硝基胍單因素誘變、雙因素誘變和三重因素誘變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明三重誘變的效果最好。Y首先經(jīng)過連續(xù)的紫外誘變后，得到的突變菌株Y1的GSH產(chǎn)量比Y提高了51.6％。Y1再采用亞硝酸多次連續(xù)誘變后，得到突變菌株Y2，GSH產(chǎn)量達(dá)到147.53mg/L，比Yl提高了4.7%。最后使用亞硝基胍對(duì)Y2進(jìn)行誘變，得到了GSH產(chǎn)量比Y2提高了3.1%的突變

3、菌株Y3。
　　對(duì)突變菌株Y3，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基及環(huán)境條件的優(yōu)化。發(fā)酵培養(yǎng)基組分的優(yōu)化組合為葡萄糖20g/L，酵母粉3g/L，(NH4)2S044g/L，KH2PO44.0g/L，MgSO41.5g/L。其次考察了發(fā)酵環(huán)境因素酵母菌GSH產(chǎn)量的影響，確定了搖瓶水平下發(fā)酵的最優(yōu)條件為接種量9%，發(fā)酵溫度采用28℃，初始pH值為5.5，裝液量為40mL/250mL。經(jīng)過發(fā)酵條件優(yōu)化后，最終GSH的產(chǎn)量提升到169.88mg/L，與初始菌