EphrinB3蛋白在皮層發(fā)育障礙致癇大鼠海馬區(qū)表達(dá)的研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)建立皮層發(fā)育不良模型與匹羅卡品癲癇大鼠模型，檢測(cè)皮層發(fā)育障礙致癇的大鼠及匹羅卡品癲癇大鼠模型中海馬區(qū)EphrinB3蛋白的表達(dá)變化，探討其在皮層發(fā)育不良致癇過(guò)程中的作用。
　　方法：1.卡莫司汀誘導(dǎo)皮層發(fā)育障礙大鼠模型的建立及評(píng)估:10只SD孕鼠在懷孕17(E17)天腹腔內(nèi)注入卡莫司汀(Carmustine，BCNU)(15mg/Kg)，所產(chǎn)仔鼠入模型組;9只SD孕鼠在E17天腹腔內(nèi)注入5％葡萄糖水(15mg/Kg

2、)，所產(chǎn)仔鼠入對(duì)照組。觀察皮層發(fā)育畸形仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育、腦濕重及仔鼠腦組織蘇木素-伊紅(HE)染色。
　　2.匹羅卡品癲癇模型的建立:隨機(jī)從皮層發(fā)育不良組及對(duì)照組抽取P60天雄鼠建立匹羅卡品癲癇模型，制備皮層發(fā)育障礙癲癇組（MCD+EP組）、普通大鼠癲癇組（EP組）、皮層發(fā)育障礙組(MCD組)及對(duì)照組（CON組）。
　　3.分別比較模型組和對(duì)照組大鼠的癲癇發(fā)生的潛伏期、癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)持續(xù)的時(shí)間及癲癇發(fā)生的死亡率，評(píng)估兩組大

3、鼠的癲癇易感性。
　　4.采用免疫組化、免疫熒光及Real-time PCR分析方法檢測(cè)各組在SE誘導(dǎo)成功后1天（急性期）、14天（靜止期）及60天（慢性期）三個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬齒狀回中EphrinB3蛋白及mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.皮層發(fā)育障礙模型仔鼠一般狀態(tài)較對(duì)照組差。腦組織HE染色示模型組仔鼠的大腦皮質(zhì)變薄、皮質(zhì)及海馬層狀結(jié)構(gòu)紊亂，皮質(zhì)發(fā)育不良模型成功。
　　2.在MCD基礎(chǔ)上通過(guò)氯化鋰-匹羅卡品建立匹羅

4、卡品癲癇大鼠動(dòng)物模型，建立皮層發(fā)育不良癲癇大鼠動(dòng)物模型。MCD模型鼠注射匹羅卡品后，SE發(fā)生的潛伏期顯著縮短(P＜0.05)，癲癇持續(xù)狀態(tài)時(shí)間延長(zhǎng)(P＜0.01)，成功率及死亡率增加(P＜0.01)，提示皮層發(fā)育障礙大鼠的癲癇易感性增加。
　　3.免疫組化與免疫熒光結(jié)果表明EphrinB3蛋白主要分布于海馬齒狀回;與EP組比較，MCD+EP組的EphrinB3在海馬齒狀回的表達(dá)顯著上調(diào)，差異具有顯著性(P＜0.01)，并在急性期、

5、靜止期表達(dá)下調(diào)，慢性期逐漸表達(dá)上調(diào)。與CON組比較，EP組在慢性期的EphrinB3表達(dá)也顯著上調(diào)(P＜0.01)。
　　4.Real-time PCR結(jié)果表明MCD+EP組EphrinB3 mRNA的表達(dá)水平較EP組明顯增高，并在急性期、靜止期表達(dá)下調(diào)，慢性期表達(dá)逐漸上調(diào)。
　　結(jié)論：1.EphrinB3蛋白可能參與了皮層發(fā)育障礙大鼠海馬區(qū)異常神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的興奮性調(diào)節(jié)。
　　2.EphrinB3蛋白可能使皮層發(fā)育障礙大鼠