引導(dǎo)電極對(duì)青霉素致癇大鼠海馬Cx43表達(dá)的影響研究.pdf

1、背景和目的:
　　 癇性發(fā)作可認(rèn)為是腦內(nèi)神經(jīng)元過(guò)度同步化放電所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)一系列功能失調(diào)。神經(jīng)元過(guò)度同步化放電既是一種物理現(xiàn)象,同時(shí)也是一種生物現(xiàn)象。從物理學(xué)角度放電行為屬于一種電能擴(kuò)布現(xiàn)象,如何從生物學(xué)角度考查這一能量擴(kuò)布現(xiàn)象呢?本項(xiàng)工作旨在觀察經(jīng)青霉素致癇大鼠致癇后行為學(xué)、腦電圖、致癇灶電勢(shì)、以及海馬Cx43表達(dá)的變化,并在致癇灶置入金屬電極與絕緣電極進(jìn)行干預(yù),探討癇性發(fā)作過(guò)程中能量變化機(jī)制,以及“導(dǎo)法抗癇”的可能作用。<

2、br>　　 方法:
　　 應(yīng)用青霉素經(jīng)大鼠海馬微注射制備急性癇性發(fā)作模型(注射點(diǎn)均為右側(cè)海馬)。將50只Spragtle-Dawley(SD)大鼠被隨機(jī)分為4大組,10小組,每組5只。分別觀察各組行為學(xué)、腦電圖、致癇灶電勢(shì)以及海馬Cx43的表達(dá)。分組及干預(yù)方式如下:
　　 1.生理鹽水對(duì)照組(A):5只,用生理鹽水替代青霉素行海馬注射,24h處死。
　　 2.青霉素模型組(B):15只,青霉素模型1小時(shí)亞組(B

3、1),青霉素模型3小時(shí)亞組(B3),青霉素模型24小時(shí)亞組(B24),每組5只,分別在驚厥期后1h,3h,24h處死。
　　 3.金屬電極干預(yù)組(C):15只,致癇灶置入金屬電極,金屬電極干預(yù)1小時(shí)亞組(C1),金屬電極干預(yù)3小時(shí)亞組(C3),金屬電極干預(yù)24小時(shí)亞組(C24),每組5只,分別在驚厥期后1h,3h,24h處死。
　　 4.絕緣電極干預(yù)組(D):15只,致癇灶置入絕緣電極,絕緣電極干預(yù)1小時(shí)亞組(D1),絕

4、緣電極干預(yù)3小時(shí)亞組(D3),絕緣電極干預(yù)24小時(shí)亞組(D24),每組5只,分別在驚厥期后1h,3h,24h處死。
　　 觀察記錄指標(biāo):
　　 1.行為學(xué):①潛伏期:即注藥后至癥狀發(fā)作(Racine分級(jí)2級(jí)以上)的間隔時(shí)間。②選取驚厥期后1h、3h、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn),記錄各個(gè)時(shí)間點(diǎn)每亞組大鼠發(fā)作強(qiáng)度(Racine分級(jí)評(píng)估)。
　　 2.腦電圖:在驚厥期后1小時(shí)、3小時(shí)點(diǎn)記錄10分鐘腦電圖的癇性波次數(shù)。
　　

5、 3.致癇灶電勢(shì):用數(shù)字萬(wàn)用電表(0.1mv)測(cè)量記錄注藥后0.25h,驚厥后1h、3h、24h致癇灶電勢(shì)。
　　 4.Cx43免疫組化:每組按要求時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,取海馬腦組織做石蠟切片,用免疫組化檢測(cè)Cx43表達(dá)變化,所得的陽(yáng)性著色面積與切片總面積的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)變化
　　 1.1潛伏期:青霉素模型組(B)從注藥開(kāi)始經(jīng)過(guò)12.52±4.18分鐘后出現(xiàn)Racine2級(jí)以上癇性發(fā)作

6、,金屬電極干預(yù)組(C)從注藥開(kāi)始經(jīng)過(guò)17.80±5.56分鐘后出現(xiàn)Racine2級(jí)以上癇性發(fā)作,絕緣電極干預(yù)組(D)從注藥開(kāi)始經(jīng)過(guò)12.08±3.90分鐘后才出現(xiàn)Racine2級(jí)以上癇性發(fā)作。金屬電極干預(yù)組(C)較青霉素模型(B)組潛伏期延長(zhǎng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05),而絕緣電極組(D)較青霉素模型組模型潛伏期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 1.2癇性發(fā)作強(qiáng)度:青霉素致癇大鼠1小時(shí)發(fā)作以4級(jí)為主,3小時(shí)發(fā)作最強(qiáng)5級(jí)為主,金屬電極干預(yù)組

7、較青霉素模型組同時(shí)間點(diǎn)發(fā)作強(qiáng)度減弱,1小時(shí)為3-4級(jí),3小時(shí)組為4-5級(jí),絕緣電極干預(yù)組1小時(shí)以3-4級(jí)為主,3小時(shí)以5級(jí)為主,絕緣電極干預(yù)組與青霉素模型組同時(shí)間點(diǎn)發(fā)作強(qiáng)度無(wú)明顯差別。
　　 2.腦電圖
　　 生理鹽水對(duì)照組(A)腦電圖波形類似正常大鼠。在驚厥期1小時(shí)、3小時(shí)點(diǎn)記錄各組大鼠腦電圖10分鐘內(nèi)癇性波次數(shù):青霉素模型組(B)1小時(shí)256.80±15.94次、3小時(shí)372.20±45.19次;金屬電極干預(yù)組(C)

8、1小時(shí)190.60±20.24次、3小時(shí)298.oo±37.70次;絕緣電極干預(yù)組(D)1小時(shí)262.00±31.62次、3小時(shí)352.00±40.15次。金屬電極干預(yù)組(C)較青霉素模型組(B)記錄到的癇性波次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);金屬電極干預(yù)組(C)較絕緣電極干預(yù)組(D)記錄到的癇性波次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);絕緣電極干預(yù)組(D)與青霉素模型組(B)記錄到的癇性波次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

9、>　　 3.致癇灶電勢(shì)變化
　　 測(cè)量生理鹽水對(duì)照組(A),致癇灶電勢(shì)在70-80mv上下波動(dòng),波幅變化不大致癇灶電勢(shì)近似在統(tǒng)一高度;測(cè)量青霉素模型組(B)、金屬電極干預(yù)組(C)、絕緣電極干預(yù)組(D)注藥后0.25h,驚厥期后1h、3h、24h各時(shí)間點(diǎn)致癇灶電勢(shì),各組電勢(shì)均有由低到高再到低趨勢(shì);金屬電極干預(yù)組(C)各時(shí)間點(diǎn)電勢(shì)與青霉素模型組(B)比較電勢(shì)低(P＜0.05),絕緣電極干預(yù)組(D)各時(shí)間點(diǎn)電勢(shì)與青霉素模型組(B)相

10、比無(wú)降低。
　　 4.免疫組化結(jié)果
　　 各組大鼠腦皮層以及海馬CA1、CA2、CA3、DG區(qū)均可以見(jiàn)到Cx43免疫陽(yáng)性細(xì)胞(膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)元)。選擇CA3區(qū)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,青霉素模型組(B1、B3、B24)、金屬電極干預(yù)組(C1、C3、C24)、絕緣電極干預(yù)組(D1、D3、024)各組與生理鹽水對(duì)照組(A)比較Cx43表達(dá)均升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在1、3、24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)上比較,青霉素模型組(B3)較絕緣