G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(GPR30)激動劑G-1抑制人主動脈平滑肌細胞遷移作用的研究.pdf

1、目的：血管平滑肌細胞(VSMC)遷移在心血管系統(tǒng)疾病如動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤形成中具非常重要作用。雌激素在動脈粥樣硬化形成及發(fā)展過程中具重要保護作用。GPR30(G-protein coupled estrogen receptor)作為雌激素受體可被雌激素及其特異性激動劑G-1激活從而調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移等功能。本實驗旨在通過運用GPR30特異性激動劑G-1來研究GPR30激活對PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMC細胞遷移的影響，以及

2、GPR30激活對細胞遷移相關(guān)基因MMP2和MMP9表達及相關(guān)信號通路激酶的影響。
　　 方法：采用人主動脈平滑肌細胞系(human aortic smooth muscle cell，hASMCs)為實驗用細胞，PDGF-BB作為誘導(dǎo)細胞遷移的外源因子。經(jīng)劃痕試驗檢測G-1對細胞遷移作用的影響；通過RT-PCR及Western Blot方法檢測GPR30在hASMCs細胞系中的表達情況；并通過GPR30 siRNA干擾方法使GP

3、R30沉默，驗證G-1對細胞遷移作用是否通過GPR30而產(chǎn)生；通過Real-time PCR及Western Blot方法檢測G-1激活GPR30對細胞遷移相關(guān)基因MMP2和MMP9表達的影響；用MAPK、EGFR抑制劑PD98059和AG1478檢測MAPK、EGFR激酶等信號通路是否參與G-1激活GPR30對細胞遷移的影響。
　　 結(jié)果：1.G-1抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的hASMCs細胞遷移，G-1處理8 h后具最佳抑制效果

4、，并且G-1對細胞遷移的抑制具有濃度依賴性。2.GPR30在hASMCs細胞中有表達。3.hASMCs細胞中GPR30表達沉默可逆反G-1抑制細胞遷移作用。4.G-1下調(diào)PDGF-BB誘導(dǎo)的MMP9表達，對MMP2表達沒有明顯影響。5.PD98059和AG1478不影響G-1對細胞遷移的抑制作用。
　　 結(jié)論：G-1通過激活GPR30受體而抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的hASMCs細胞遷移并具有濃度依賴性；G-1激活GPR30受體后下