雌激素受體GPR30在乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用.pdf

1、背景與目的: 雌激素參與調(diào)節(jié)大量的生物學(xué)過程，傳統(tǒng)的雌激素效應(yīng)是作為轉(zhuǎn)錄因子通過ERα，ERβ和雌激素受體相關(guān)蛋白γ發(fā)揮作用。不同于傳統(tǒng)的雌激素核受體，新的雌激素膜受體GPR30則通過細(xì)胞內(nèi)第二信使途徑發(fā)揮效應(yīng)，同時(shí)與抗雌激素表現(xiàn)出明顯的親和力。研究表明GPR30參與了細(xì)胞增殖、周期以及凋亡的調(diào)節(jié)。作為激素敏感組織之一，雌激素不僅促進(jìn)乳腺的發(fā)育，而且刺激乳腺癌的生長(zhǎng)。那么這一新的雌激素受體在乳腺癌中發(fā)揮什么作用呢？為此，本研究以

2、乳腺癌細(xì)胞SKBR3為研究對(duì)象，以干擾GPR30的表達(dá)為手段，分析GPR30表達(dá)與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的相關(guān)性。 方法: 運(yùn)用siRNA干擾SKBR3細(xì)胞中GPR30的表達(dá)，給予17β-E2、EGF、SB202190干擾細(xì)胞生長(zhǎng)，運(yùn)用半定量RT-PCR檢測(cè)各處理組GPR30 mRNA的表達(dá)水平，以MTT法檢測(cè)干擾GPR30表達(dá)后細(xì)胞生長(zhǎng)的變化。 結(jié)果: 1.成功構(gòu)建了2個(gè)重組質(zhì)粒pshRNAGPR301和pshR

3、NAGPR302，并應(yīng)用GenEscortTMⅠ成功轉(zhuǎn)染至乳腺癌細(xì)胞株SKBR3，RT-PCR結(jié)果顯示GPR30基因在mRNA水平被顯著抑制，其表達(dá)率分別為正常細(xì)胞的64.25％和54.24％。 2.使用17β-E2、EGF、SB202190干擾細(xì)胞生長(zhǎng)，1小時(shí)和24小時(shí)半定量RT-PCR檢測(cè)GPR30表達(dá)，結(jié)果顯示各組GPR30表達(dá)無差異；使用MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)，結(jié)果顯示：17β-E2對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無影響，EGF發(fā)揮了促生長(zhǎng)作用，