雌激素受體β表達對于乳腺癌細胞生長特性及內(nèi)分泌治療的影響.pdf

1、乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一。在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中，內(nèi)源性雌激素起著主要作用，約50％的原發(fā)性乳腺癌與雌激素相關。傳統(tǒng)的內(nèi)分泌治療主要針對ERα，然而大量臨床研究表明：ERα陽性的乳腺癌患者，只有約60%的患者對他莫昔芬激素治療有效，40%的患者對于內(nèi)分泌治療不敏感，而 ERα陰性的乳腺癌中有10%的患者對于內(nèi)分泌治療有效。
　　ERβ自1996年Mosselman等人發(fā)現(xiàn)以來，因為其在乳腺癌中的潛在作用以及對于預測內(nèi)分

2、泌治療反應性的價值成為了研究熱點。ERβ與ERα在分子結(jié)構(gòu)和受體分布上的不同提示二者在功能上存在著差異。然而對于 ERβ的表達在腫瘤中的生物學作用以及 ERβ表達提示乳腺癌激素治療敏感還是耐藥，現(xiàn)階段的研究結(jié)果還存在著巨大的差異。有研究表明ERβ的生物學功能受ERα表達狀態(tài)的影響，所以，我們想通過本次試驗研究在ERα陰性和ERα陽性的不同條件下ERβ的功能。
　　目的：
　　通過將包含 ERβ基因的質(zhì)粒 pReveicer-

3、M72-ERβ對MCF-7細胞和MDA-MB-231進行轉(zhuǎn)染，研究在ERα陽性和ERα陰性的不同條件下，外源性ERβ的表達對乳腺癌細胞生長的影響，以及 ERβ的表達是否改變細胞對雌二醇、他莫昔芬的反應；探討ERβ的功能及ERβ與ERα之間的相互關系及可能的相互作用，以及ERβ能否作為一種預測因子，與ERα一起共同預測腫瘤對于內(nèi)分泌治療的反應性。
　　方法:
　?。?）提取包含 ERβ基因的質(zhì)粒 pReveicer-M72-E

4、Rβ并通過瓊脂糖凝膠電泳實驗驗證。
　?。?）利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 Lipofectmine LTX將質(zhì)粒pReveicer-M72-ERβ對MCF-7細胞和MDA-MB-231進行轉(zhuǎn)染，兩種細胞均設置空載體組和空白對照組。
　?。?）細胞轉(zhuǎn)染后20小時，通過熒光顯微鏡、免疫熒光及Western Blot等方法驗證ERβ基因在細胞中的表達。
　?。?）將細胞分為MCF-7組、MCF-7ERβ組、MCF-7空組、MDA-M

5、B-231組、MDA-MB-231 ERβ組、MDA-MB-231空組，對各組細胞進行雌二醇、他莫昔芬處理，并同時設置未處理組作為對照。用MTT法繪制各組細胞在不同處理因子作用下的生長曲線。
　　結(jié)果:
　?。?）瓊脂糖凝膠電泳實驗顯示提取的質(zhì)粒 pReveicer-M72-ERβ與預期大小相一致。
　?。?）Western Blot證實MCF-7ERβ組和MDA-MB-231 ERβ組的ERβ表達量與各自對照組相比顯

6、著增高。
　?。?）與 MDA-MB-231組和MDA-MB-231空組相比，MDA-MB-231 ERβ組細胞生長速度加快，三組細胞對于雌二醇、他莫昔芬的反應無差異性。
　　（4）與MCF-7組和MCF-7空組對比，MCF-7ERβ組細胞生長速度減慢；在雌二醇的作用下，MCF-7ERβ組細胞的生長速度比其他兩組細胞減慢，三組細胞對于他莫昔芬的反應無差異性。
　　結(jié)論:
　?。?）在ERα表達的條件下，ERβ的表