雌激素受體GPR30在人子宮肌瘤以及血管平滑肌細(xì)胞中的作用和機(jī)理研究.pdf

1、第一部分雌激素受體GPR30在人子宮肌瘤中的作用和機(jī)理研究
　　目的:子宮肌瘤是最常見的一種婦科良性腫瘤，由平滑肌細(xì)胞異常增生而形成，主要發(fā)生于育齡期婦女，其最顯著的癥狀是月經(jīng)過多、盆腔不適等。雌激素在子宮肌瘤的發(fā)病過程中具有重要作用。然而，在人子宮肌瘤和正常子宮肌細(xì)胞中，由雌激素受體GPR30介導(dǎo)17β-雌二醇所引起的細(xì)胞增殖作用卻未見報(bào)道。因此，本研究是為了探明G蛋白偶聯(lián)受體30(GPR30)在子宮肌瘤和與之相對(duì)應(yīng)的子宮肌中的

2、表達(dá)差異，并探討GPR30在子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的作用機(jī)制，為子宮肌瘤的非手術(shù)治療提供理論依據(jù)。
　　方法和結(jié)果:人子宮肌瘤組織和子宮肌組織由天津中心婦產(chǎn)科醫(yī)院提供，來自于接受子宮切除術(shù)的病人，年齡在35-50歲之間，近三個(gè)月內(nèi)無固醇類使用史。兩種組織中GPR30的表達(dá)被檢測(cè)，原代培養(yǎng)的細(xì)胞來源于這些子宮肌瘤組織和正常子宮肌組織。通過western blot和real-time PCR方法，我們發(fā)現(xiàn)與正常子宮肌組織相比，GPR

3、30在子宮肌瘤組織中高表達(dá)。在正常子宮肌組織中，僅有3/9的病人樣本通過western blot方法檢測(cè)到有GPR30蛋白表達(dá)，GPR30蛋白的表達(dá)水平遠(yuǎn)低于GPR30蛋白在肌瘤中的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。激光共聚焦顯微鏡掃描揭示了在子宮肌瘤組織和培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中GPR30的核定位。0.1 mM17β-雌二醇(E2)分別處理兩種細(xì)胞后，子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中GPR30 mRNA的表達(dá)增加，但是在子宮平滑肌細(xì)胞中GPR30

4、mRNA的表達(dá)卻下調(diào)。GPR30激動(dòng)劑G-1分別處理兩種細(xì)胞后，G-1同時(shí)上調(diào)了兩種不同類型細(xì)胞中p44/42有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平。不同的是，MEK抑制劑PD98059卻完全抑制了子宮平滑肌細(xì)胞中G-1誘導(dǎo)的p44/42的磷酸化，而子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞則沒有這一現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　1.GPR30在子宮肌瘤組織以及原代培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中高表達(dá)。并且通過免疫熒光和激光共聚焦顯微鏡掃描，發(fā)現(xiàn)GP

5、R30在子宮肌瘤組織和原代培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中，定位于細(xì)胞核。
　　2.E2刺激了原代培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中GPR30 mRNA的表達(dá)。
　　3.在人子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞和子宮平滑肌細(xì)胞中，GPR30選擇性激動(dòng)劑G-1激活了p44/42 MAPK信號(hào)通路。
　　第二部分雌激素受體GPR30在血管平滑肌細(xì)胞中的作用和機(jī)理研究
　　目的:動(dòng)脈粥樣硬化，是心臟疾病和中風(fēng)的首要原因，其中，血管平滑肌細(xì)胞過度增殖是

6、動(dòng)脈粥樣硬化等多種心血管疾病細(xì)胞病理學(xué)的發(fā)病基礎(chǔ)之一。雌激素對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用。然而，雌激素對(duì)于ERs敲除的小鼠體內(nèi)新生內(nèi)膜的形成仍然具有抑制作用，這提示我們一個(gè)被稱為新型雌激素受體G蛋白偶聯(lián)受體30(GPR30)可能通過抑制平滑肌細(xì)胞的增殖，從而抑制新生內(nèi)膜的形成。為了驗(yàn)證以上假設(shè)，本研究探討了GPR30在抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖作用中的分子機(jī)制，從而為以平滑肌過度增殖為病理基礎(chǔ)的疾病如動(dòng)脈粥樣硬化等提供治療的理論依據(jù)。
　

7、　方法和結(jié)果:我們利用小鼠頸總動(dòng)脈結(jié)扎所構(gòu)建的新生內(nèi)膜增生模型，檢測(cè)了GPR30特異性配體G-1的作用。正如期望的那樣，G-1的處理顯著抑制了由結(jié)扎誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜病變的發(fā)展。為了進(jìn)一步揭示潛在的機(jī)制，我們檢測(cè)了G-1對(duì)培養(yǎng)的人血管平滑肌細(xì)胞的作用。在人血管平滑肌細(xì)胞中，G-1的處理顯著誘導(dǎo)了表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的激活和磷酸化，和p44/42有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激活和磷酸化。綜上所述，我們的結(jié)果顯示G-1抑制新生內(nèi)