G-1抑制人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖的機理研究.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類健康的一種常見疾病，涉及到多種細(xì)胞及細(xì)胞因子的相互作用。在它的發(fā)生和發(fā)展過程中，平滑肌細(xì)胞的增殖起了重要作用，而新型雌激素受體GPR30在多種細(xì)胞中參與了細(xì)胞增殖的相關(guān)過程，我們在體內(nèi)和體外檢測GPR30以及其特異性配體G-1對平滑肌細(xì)胞增殖的作用，并且探究可能參與其中的相關(guān)信號通路和相關(guān)細(xì)胞周期蛋白在藥物處理后的表達(dá)差異，從而為因平滑肌過度增殖而產(chǎn)生的疾病如動脈粥樣硬化等提供治療的理論依據(jù)。
　　

2、 方法：體內(nèi)實驗采用頸總動脈結(jié)扎C57BL小鼠為新生內(nèi)膜增生模型，利用高低劑量的G-1用藥物載體涂抹在結(jié)扎后的頸總動脈，3周后，血管組織經(jīng)過石蠟包埋、切片和HE染色，在顯微鏡下觀察不同處理情況下新生內(nèi)膜增生的情況。體外實驗以人的胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞系為主要研究對象，通過細(xì)胞計數(shù)和WST-1等手段研究G-1對細(xì)胞增殖的影響，在信號通路相關(guān)方面，采取Westernblot檢測了細(xì)胞在不同濃度和不同時間段處理后的p44/42 MAPK信號

3、通路的激活情況，以及細(xì)胞周期相關(guān)相關(guān)蛋白在藥物處理后的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：經(jīng)過石蠟包埋、切片、HE染色，在頸動脈結(jié)扎小鼠模型中，G-1會抑制新生內(nèi)膜的增生，與溶劑對照相比，G-1處理后，頸總動脈的中膜平滑肌細(xì)胞增殖明顯減少，說明在體內(nèi)G-1可以有效抑制平滑肌細(xì)胞的增殖。另外我們在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，藥物處理后，細(xì)胞增殖能力下降，并且伴隨著時間和濃度依賴性的p44/42 MAPK通路激活，同時細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子p27蛋白表達(dá)水平升