IR與PPARα-γ在NASH中變化及意義的實驗性研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)因素所致的以肝細(xì)胞脂肪變性為主的臨床病理綜合征。伴有炎癥的NAFLD稱為非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitisNASH),約占NAFLD的3％,其中25％可能進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化及肝衰竭,甚至肝細(xì)胞癌。目前對于NASH仍無有效的治療方法。有研究證實胰島素抵抗(Insulin Re

2、sistance IR)是NAFLD發(fā)病的主要環(huán)節(jié),它使機體脂質(zhì)代謝平衡紊亂,導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚；然后是氧自由基引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)及其以瀑布效應(yīng)誘發(fā)的炎癥反應(yīng),因此IR成為當(dāng)前研究和早期防治NAFLD的熱點。
　　 近年來研究發(fā)現(xiàn),過氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome proliferator-activated receptors PPARs)在改善IR方面發(fā)揮著極其重要的作用。這種新型的甾體類激素受體,因能被一

3、類脂肪酸樣化合物——過氧化物酶體增殖劑激活而被命名為PP激活受體。根據(jù)其結(jié)構(gòu)及功能可分為3種亞型:PPARα、PPARβ(或稱PPARδ)、PPARγ,在肝細(xì)胞內(nèi)PPARα含量較豐富。有實驗表明PPARα是調(diào)節(jié)胰島素敏感性的一個重要因素,它通過對肝內(nèi)脂肪酸氧化和炎癥反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控,在肝臟脂類代謝和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。PPARα的激動劑是貝特類藥物,它們在臨床上就是廣泛應(yīng)用的降甘油三脂的藥物；PPARγ主要表達(dá)于脂肪組織,介導(dǎo)

4、脂肪細(xì)胞的分化。被活化后,能夠促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化,增強脂肪細(xì)胞對胰島素的敏感性,改善機體的胰島素抵抗。胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物(thiazolidinediones,TZDs)是PPARγ的激動劑；因此,PPARγ激動劑和具有降脂作用的PPARα激動劑都可以改善胰島素抵抗。但鑒于兩類型受體激動劑發(fā)揮作用的部位不同,其產(chǎn)生的效應(yīng)也有差異。如何找到兩種效應(yīng)的平衡點以更好地服務(wù)于臨床,則是今后研究的核心問題。
　　 因此,我們的研

5、究就是在高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝胰島素抵抗大鼠模型造模成功后,給予PPARα激動劑非諾貝特和PPARγ激動劑羅格列酮干預(yù),探討它們對肝臟脂肪變的炎癥程度和胰島素敏感性的作用,為進(jìn)一步認(rèn)識NAFLD的發(fā)病機制,而合理進(jìn)行早期防治提供理論及實驗依據(jù)。
　　 目的：
　　 研究PPARs在SD大鼠NAFLD/NASH的形成中的作用,尤其是PPARα、γ,并初步從胰島素抵抗方面探討其機制,為有效防治本病提供新的思路。
　　

6、方法：
　　 1.動物模型的制備
　　 選取雄性(Sprague Dawley)SD大鼠,正常對照組喂飼普通飼料,其蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物提供能量比分別為21％、19％、60％；高脂組喂飼79％普通飼料+高脂飼料,配方為:1％膽固醇、10％蛋黃粉、10％豬油,其蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物提供能量比分別為21％、59％、20％,自由進(jìn)食及飲水。
　　 2.實驗分組
　　 將SD大鼠60只隨機分為正常對照組(

7、NC group,n=20)、高脂對照組(FC group,n=20),高脂加羅格列酮組(FR group,n=10)、高脂加非諾貝特組(FF group,n=10)。飼養(yǎng)12周末時隨機取NC組與FC組各10只-并做高胰島素正葡萄糖鉗夾實驗及肝組織的HE染色,確定造模成功。然后給予羅格列酮、非諾貝特及繼續(xù)高脂飲食干預(yù),共4周。
　　 3.大鼠體重的變化電子天平稱取體重。
　　 4.胰島素敏感性的測定
　　 以高胰

8、島素正葡萄糖鉗夾技術(shù)穩(wěn)態(tài)時的葡萄糖輸注率來評價胰島素敏感性。
　　 5.肝臟組織學(xué)檢查
　　 采用石蠟切片,蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin HE)染色,光鏡觀察肝臟病理變化。
　　 6. PPARα、γmRNA的表達(dá)
　　 用半定量的逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)水平以及羅格列酮對PPARγmRNA和非諾貝特對PPARαmRNA表達(dá)水平的影響

9、。
　　 7.血清生化學(xué)檢查
　　 取血清樣本,采用全自動血清生化分析儀檢測血脂及轉(zhuǎn)氨酶等生化指標(biāo)的含量變化,由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生化室協(xié)助測定。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組大鼠體重的變化情況
　　 1.6周末NC組的體重與FF、FR、FC組大鼠相比,有顯著性差異(P<0.01)。FF組體重明顯低于FC組,FR組較FF組有增長趨勢。
　　 2.胰島素敏感性的變化情況
　　 各組

10、之間比較有統(tǒng)計學(xué)意義,兩兩比較顯示,NC組明顯高于其它各組,而FF組與FR組均高于FC組,FR組和FF組相比也有差異。
　　 3.HE染色結(jié)果顯示
　　 肉眼及光鏡所見NC組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)始終大致正常。FC組肝細(xì)胞均呈彌漫性脂肪變性,伴有肝細(xì)胞壞死和炎性細(xì)胞浸潤,并有局部點灶狀壞死,但尚無明顯肝纖維化；FF組脂肪變程度較FC組明顯減輕,未見明顯肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤；而FR組以大泡脂肪變?yōu)橹?FF組病變程度較FR組與FC組

11、均輕。
　　 4.肝臟PPARα mRNA及大網(wǎng)膜PPARγmRNA表達(dá)的變化
　　 各組間PPARα的mRNA變化規(guī)律為:FF、NC、FR、FC組表達(dá)量依次降低,FF與FR組有統(tǒng)計學(xué)意義；大網(wǎng)膜組織的PPARγmRNA表達(dá)為FC>FF>NC>FR,FF與FR組也有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5.血脂、血糖及轉(zhuǎn)氨酶的變化
　　 TG與TC:16周末血中TG的含量在FC組明顯高于NC、FF和FR組(P<0.05),

12、而FF組低于FR組,有統(tǒng)計學(xué)意義；TC與TG的變化相似,但在TC中,FF組與FR組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。血糖:四組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義,但FC、FF及FR組有高于NC組的趨勢。ALT與AST:血中ALT四組之間比較有顯著差異(P=0.007,<0.01),而FC組與FF、FR組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但有降低趨勢；AST的變化與ALT基本相似。
　　 結(jié)論：
　　 1.高脂喂養(yǎng)12周末,肝臟組織HE

13、染色觀察到所有動物均出現(xiàn)程度不同的彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性,小葉內(nèi)和匯管區(qū)有炎細(xì)胞浸潤,胰島素敏感性明顯降低,證實大鼠脂肪肝胰島素抵抗模型制備成功。
　　 2.體重、肝臟的脂肪變和炎癥程度與IR呈正相關(guān),表明NAFID與IR可能為因果關(guān)系。
　　 3.PPARa的mRNA與IR呈負(fù)相關(guān),PPARγmRNA與IR呈正相關(guān),而使用PPARs激動劑后可以改善IR及肝臟的脂肪變、炎癥壞死,使血液中TC、TG降低,認(rèn)為PPARs激動劑