TFF3和S-100+DC在實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠脾臟中的變化及意義.pdf

1、目的:胃潰瘍是一種黏膜的特殊損傷，其形成和修復(fù)過程是在神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫調(diào)節(jié)多方面、多因素作用下完成的。最近研究表明大鼠淋巴組織存在腸三葉因子3(TFF3)，但其在潰瘍形成及愈合過程中的作用未見報(bào)道。同時(shí)，樹突狀細(xì)胞(DC)是機(jī)體目前所知的功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中處于中心地位。本課題旨在利用免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)，對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠脾臟各部位TFF3基因和蛋白水平以及S-100+DC數(shù)量的改變

2、進(jìn)行研究，探討TFF3和S-100+DC在潰瘍期間的發(fā)揮的作用及可能機(jī)制。
　　 方法:采用冰乙酸黏膜下注射法復(fù)制大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型，動(dòng)物分為:實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍組（潰瘍組）、鹽水對(duì)照組（鹽水組），正常組。潰瘍組和鹽水組分別于造模后1、2、4、6、10、14、23天取材，正常組在造模后1天取材，以免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)各組脾臟TFF3的表達(dá)和S-100+DC的變化;RT-PCR檢測(cè)脾臟TFF3 mRNA的轉(zhuǎn)錄情況。
　　 結(jié)果

3、:
　　 1.TFF3陽性反應(yīng)物定位TFF3陽性反應(yīng)物呈棕黃色顆粒狀分布于胞質(zhì)中。脾臟TFF3陽性細(xì)胞分布于邊緣區(qū)、白髓和紅髓中的脾索中。正常組TFF3陽性細(xì)胞呈淺棕黃色，數(shù)量少;潰瘍組和鹽水組陽性細(xì)胞呈棕黃色，數(shù)量多。白髓中TFF3陽性細(xì)胞散在分布，形態(tài)不規(guī)則，一般有多個(gè)突起，核較大，位于細(xì)胞中央;邊緣區(qū)細(xì)胞成群或散在分布，數(shù)量較多;紅髓中陽性細(xì)胞散在分布，主要分布于脾索中。經(jīng)鄰片免疫組化顯示，部分TFF3表達(dá)于S-100+D

4、C中。
　　 2.免疫組織化學(xué)染色及圖像分析結(jié)果:
　　 正常組和鹽水組大鼠脾臟各部位TFF3表達(dá)較弱。TFF3在不同時(shí)期胃潰瘍大鼠脾臟中各部位的表達(dá)不同，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:白髓:1d、2d組TFF3表達(dá)逐漸增強(qiáng)、陽性細(xì)胞數(shù)量增多，4d、6d組染色強(qiáng)度稍有降低、數(shù)量增多，10d組TFF3陽性信號(hào)強(qiáng)度和數(shù)量達(dá)高峰，然后14d、23d組陽性細(xì)胞強(qiáng)度和數(shù)量逐漸降低，但仍明顯高于正常組和鹽水對(duì)照組，其他各組TFF3表達(dá)均高于正常組(

5、P＜0.05)，2～23d各潰瘍組TFF3表達(dá)均高于鹽水組(P＜0.05);邊緣區(qū):1d組TFF3表達(dá)逐漸增強(qiáng)、陽性細(xì)胞數(shù)量增多，2d、4d各值略有降低，6d各值增高、陽性信號(hào)強(qiáng)度達(dá)峰值，10d、14d各值逐漸降低，23d有所升高，但維持在一個(gè)較高的水平，1d、2d和6d TFF3表達(dá)與正常組相比明顯增高(P＜0.05)，其中6d組與鹽水組相比明顯增高(P＜0.05)。紅髓:1d、2d TFF3表達(dá)逐漸增強(qiáng)、數(shù)量增多，4d各值降低，6d

6、各值增高、其陽性信號(hào)強(qiáng)度高峰，10d、14d、23d各值下降，但維持較高水平，其中1d、2d、6d和14d表達(dá)與正常組相比明顯增高（P＜0.05），其中6d組與鹽水組相比明顯增高。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)TFF3 mRNA的表達(dá)脾臟各組均檢測(cè)到TFF3mRNA轉(zhuǎn)錄，TFF3及GAPDH的RT-PCR產(chǎn)物分別為位于100～250bp和500～750bp之間的一條清晰擴(kuò)增帶，將所得條帶進(jìn)行吸光度檢測(cè)，結(jié)果顯示潰瘍組TFF3/GA

7、PDH光密度比值在潰瘍各組均高于正常組和鹽水組(P＜0.05)，以潰瘍術(shù)后6d、10d表達(dá)較為強(qiáng)烈。
　　 4.脾臟S-100+DC在胃潰瘍自愈期間的變化潰瘍組和鹽水對(duì)照組與正常組相比各組S-100+DC數(shù)量均增多。潰瘍1-10d組脾臟各部位S-100+DC數(shù)密度值逐漸增多，10d達(dá)到最高值，14d組其略有減少，但仍維持在一個(gè)較高的水平，其中6d組數(shù)密度值與鹽水組的相比顯著增高(P＜0.05)，6～14d各組數(shù)密度值與正常組的相

8、比顯著增高（P＜0.05）。而鹽水對(duì)照組的變化趨勢(shì)與潰瘍組一致，脾臟各部位S-100+DC數(shù)量與潰瘍組相比數(shù)量少，分布稀疏，6d組與正常組相比明顯增高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.脾臟能夠合成和表達(dá)TFF3，且部分由S-100+DC合成。
　　 2.潰瘍期間脾臟各部位TFF3蛋白和基因呈高水平表達(dá)。
　　 3.潰瘍期間脾臟TFF3通過調(diào)節(jié)脾臟的免疫反應(yīng)性促進(jìn)潰瘍的愈合。
　　 4.潰