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文檔簡(jiǎn)介
1、背景和目的:
HER2/ErbB2/P185屬于人表皮生長(zhǎng)因子受體家族,對(duì)細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等起到主要的調(diào)控作用。已知HER2在許多人類惡性腫瘤特別是胃癌和乳腺癌中過(guò)度表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控異常以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展,因此HER2已成為腫瘤靶向藥物開(kāi)發(fā)的一個(gè)重要靶點(diǎn)??笻ER2抗體藥物如Trastuzumab和Pertuzumab已經(jīng)陸續(xù)上市,但這些藥物仍舊存在臨床有效率低和藥物耐受的問(wèn)題,這促使著人們繼續(xù)研究和開(kāi)發(fā)
2、新一代的腫瘤靶向藥物和更優(yōu)化的腫瘤治療方案。本課題組開(kāi)發(fā)了一株新型抗HER2人鼠嵌合抗體chA21,前期研究表明chA21對(duì)人乳腺癌細(xì)胞BT-474和卵巢癌細(xì)胞SKOV-3裸鼠皮下移植瘤具有良好的抗腫瘤活性。本研究擬在新建立的人胃癌移植瘤模型及高表達(dá)HER2的自發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌小鼠移植瘤模型中探索抗HER2抗體等靶向藥物的抗腫瘤活性和作用機(jī)制,并比較該抗體與Trastuzumab作用的異同點(diǎn)。
材料與方法:
?。?)取4
3、-5周齡雌性裸鼠,注射高表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子受體HER2的人胃癌細(xì)胞株NCI-N87,建立移植瘤模型。待腫瘤長(zhǎng)至約100mm3時(shí)分組,抗體給藥組劑量均為20mg/kg,每周1-2次。每周兩次測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑和短徑,計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)速度與抑制率(用T/C值表示,即治療組相對(duì)腫瘤體積/PBS對(duì)照組相對(duì)腫瘤體積)。并利用免疫組化及免疫印跡的方法檢測(cè)抗體處理的腫瘤細(xì)胞中HER2受體、ERK及AKT信號(hào)通路蛋白的表達(dá)和磷酸化水平變化情況。
?。?)將
4、重組HER2全長(zhǎng)基因轉(zhuǎn)染含有熒光素酶基因的小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1-Luc,用G418加壓篩選,采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡方法鑒定4T1-Luc穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中HER2表達(dá)。將細(xì)胞注射BALB/c小鼠或裸鼠皮下乳房墊,待腫瘤生長(zhǎng)穩(wěn)定后隨機(jī)分為4組給藥,即PBS對(duì)照、chA21、Trastuzumab和抗體聯(lián)合組。每周2次測(cè)量腫瘤體積,并計(jì)算抑瘤率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用活體動(dòng)物成像儀監(jiān)測(cè)體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移情況。
結(jié)果:
?。?)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí),c
5、hA21、Trastuzumab和聯(lián)用組各組腫瘤體積T/C值分別為62%、39%和7.0%;腫瘤體積抑制率分別為38.88%、60.14%和92.73%;瘤重抑制率分別為39.58%、59.46%和91.89%。chA21給藥組小鼠的N87移植瘤中HER2的蛋白水平與對(duì)照相比顯著下降,HER2受體1248位酪氨酸的磷酸化水平也顯著下降。Trastuzumab給藥組的HER2蛋白水平和磷酸化水平均沒(méi)有明顯變化。同時(shí),chA21組移植瘤中E
6、RK和Akt通路活性與對(duì)照組也有明顯變化,Trastuzumab組均沒(méi)有顯著變化。HE染色及免疫組化(IHC)結(jié)果顯示,與PBS對(duì)照腫瘤切片相比,chA21給藥組的腫瘤組織中微血管數(shù)目減少,凋亡細(xì)胞增多;與PBS對(duì)照腫瘤切片相比,chA21給藥組的腫瘤組織中微血管數(shù)目減少,凋亡細(xì)胞增多;HER2染色水平也有顯著降低,與上述western blotting結(jié)果一致。Trastuzumab給藥組與PBS組比較無(wú)顯著變化。
?。?)經(jīng)
7、過(guò)G418篩選獲得了多個(gè)4T1-Luc/HER2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株克隆,流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡均證實(shí)HER2高表達(dá)。這些克隆均具有良好的成瘤性,細(xì)胞注射1周后可見(jiàn)腫瘤穩(wěn)定生長(zhǎng),2-3周后可觀察到腫瘤轉(zhuǎn)移到肺、面部、腹股溝等部位。在BALB/c小鼠中,抗體聯(lián)合組抑瘤率達(dá)43.3%,與PBS對(duì)照組之間的差異有顯著性(P<0.05),并且明顯優(yōu)于抗體單用組抑瘤率(chA21組為11.1%,Trastuzumab組為23%)。而且,抗體聯(lián)合組在小鼠肺部的
8、腫瘤轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目和熒光強(qiáng)度與對(duì)照組相比明顯降低。
結(jié)論:
?。?)在NCI-N87人胃癌移植瘤模型中,chA21單用抗腫瘤效果稍弱于Trastuzumab,但與Trastuzumab聯(lián)用具有協(xié)同抗腫瘤活性。同時(shí),chA21具有顯著下調(diào)腫瘤細(xì)胞 HER2受體表達(dá)的特點(diǎn),而 Trastuzumab該作用不明顯,提示chA21的抗腫瘤作用機(jī)理與Trastuzumab有所不同。因此,我們的研究結(jié)果初步顯示了新型抗HER2抗體c
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