Caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk治療兔外傷性視神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: (1)應(yīng)用FPI建立標(biāo)準(zhǔn)化兔外傷性視神經(jīng)損傷動(dòng)物模型，并探討該模型的穩(wěn)定性。 (2)量化評(píng)價(jià)特異性caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk治療外傷性視神經(jīng)損傷的療效，并分析相關(guān)影響因素。 (3)探討caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk對(duì)兔外傷性視神經(jīng)損傷后視功能的保護(hù)作用，為臨床上外傷性視神經(jīng)損傷的治療提供新的思路。 方法: 中國(guó)純種大耳白兔148只，從中隨機(jī)選取4只兔(8只眼

2、)作為空白對(duì)照組(N組)，其余144只(288只眼)為實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組根據(jù)給藥劑量不同隨機(jī)分為低劑量組(L組，1.5μg/kg，48只)、中劑量組(M組，2.5μg/kg，48只)和高劑量組(H組，3.5μg/kg，48只)，各組根據(jù)治療后不同觀察時(shí)間，分為1、4、7、10、14和21d亞組，每組8只(16只眼)。實(shí)驗(yàn)組采取自身對(duì)照法，雙眼均建立外傷性視神經(jīng)損傷動(dòng)物模型，右眼為治療眼，左眼為對(duì)照眼。應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀(FPI)建立標(biāo)準(zhǔn)

3、化兔外傷性視神經(jīng)損傷動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)組中治療眼于損傷后30min玻璃體腔注射caspase-3抑制劑z-DEVD-fmk，對(duì)照眼注射相同體積2％二甲基亞砜。所有眼均在相應(yīng)觀察點(diǎn)行閃光視覺誘發(fā)電位檢查、HE染色、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)以及Western印跡分析檢測(cè)caspase-3蛋白表達(dá)量。 結(jié)果: (1)caspase-3的表達(dá)：z-DEVD-fmk可有效抑制視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜組織caspase-3表達(dá)和活化，治療眼和對(duì)照

4、眼的兔視網(wǎng)膜組織均可檢測(cè)到caspase-3的前體(32kDa)及其切割片段(12kDa)的特異性條帶。治療眼視網(wǎng)膜caspase-3前體及其切割片段呈低水平表達(dá)，對(duì)照眼caspase-3及其切割片段均呈高水平表達(dá)。無論是否治療，均未出現(xiàn)顯著的caspase-3前體及其切割片段表達(dá)量的時(shí)序關(guān)系。 (2)視網(wǎng)膜病理：空白對(duì)照組兔視網(wǎng)膜各層細(xì)胞排列整齊致密。實(shí)驗(yàn)組傷后1天視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(Ganglion Cells Layer，

5、GCL)內(nèi)可見毛細(xì)血管破裂出血，傷后21天GCL內(nèi)散在核染色質(zhì)濃集、邊聚的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RetinalGanglion Cells，RGCs)，可見空化的RGCs，視網(wǎng)膜各層細(xì)胞數(shù)量明顯減少，視網(wǎng)膜總厚度變薄。RGCs計(jì)數(shù)顯示3個(gè)劑量組均隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，RGCs計(jì)數(shù)比值逐步增高，其中中、高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.299)。治療后1、4、7天，不同劑量組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)，1

6、0天后可見到差異，其中低劑量組RGCs計(jì)數(shù)比明顯低于中、高劑量組(P<0.05)，中、高劑量組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 (3)F-VEP：正常白兔可引出穩(wěn)定的N-P100-N波形，潛伏期和振幅分別為42.72+/-2.74ms和8.79+/-2.12μv。傷后1天中劑量組對(duì)照眼主波P100潛伏期延長(zhǎng)為86.90+/-7.71ms，振幅降低為5.29+/.1.06μv，與空白對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后1天及4天3個(gè)劑

7、量組的實(shí)驗(yàn)眼表現(xiàn)為與對(duì)照眼相同的惡化趨勢(shì)，而第7天起實(shí)驗(yàn)眼的潛伏期和振幅均開始恢復(fù)。3個(gè)劑量組均顯示隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)，潛伏期比值逐漸降低(P<0.01)，振幅比值逐漸增高(P<0.01)，即視功能的逐漸恢復(fù)。 結(jié)論: (1)應(yīng)用FPI能夠建立穩(wěn)定的可量化的兔外傷性視神經(jīng)損傷動(dòng)物模型。 (2)caspase-3抑制劑z-DEVD—fmk通過阻斷caspase-3的作用而有效抑制RGCs凋亡，達(dá)到了視神經(jīng)保護(hù)的作用。