O-3與O-9血清型小腸結(jié)腸炎耶爾森菌競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系及細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)研究.pdf

1、目的：通過體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物染毒實(shí)驗(yàn)判斷O:3與O:9血清型菌株是否發(fā)生相互抑制的現(xiàn)象。并通過監(jiān)測(cè)O:3與O:9血清型菌株動(dòng)物感染模型中白細(xì)胞介素、TNF-α、 RANTES等23種細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)水平，初步預(yù)測(cè)O:3與O:9血清型分布變化后對(duì)細(xì)胞因子的影響，明確兩種血清型菌株的差異，為小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的病原學(xué)鑒定以及流行病學(xué)調(diào)查提供更詳盡的參考依據(jù)。
　　方法：本次研究采用體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法。1.體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):選

2、擇在同一地區(qū)、同一宿主、相同時(shí)間分離到的O:3、O:9血清型菌株各一株，傳代培養(yǎng)后，取O:3、O:9血清型菌株混合培養(yǎng)液作為混合培養(yǎng)組，同時(shí)取與混合培養(yǎng)組等量的O:3、O:9血清型菌株培養(yǎng)液?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)作為單獨(dú)培養(yǎng)組。搖菌培養(yǎng)48小時(shí)，在此期間，每隔3小時(shí)取各組菌液涂板計(jì)數(shù)菌落數(shù)。并鑒定混合培養(yǎng)平板上生長(zhǎng)的菌落的血清型別，繪制生長(zhǎng)曲線，以判斷體外實(shí)驗(yàn)中是否存在O:3、O:9血清型菌株相互競(jìng)爭(zhēng)抑制現(xiàn)象;2.動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn):用小腸結(jié)腸炎耶爾森菌體

3、建立小鼠腹腔注射感染動(dòng)物模型----O:3染毒組、O:9染毒組、O:3和O:9混合染毒組。在染毒后的48小時(shí)內(nèi)，從3小時(shí)起，每隔3小時(shí)從各組分別隨機(jī)抽取3只小鼠，拉頸處死后，取脾臟勻漿，涂板培養(yǎng)后別統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)（混合染毒組的菌落先進(jìn)行血清型別鑒定，再分別統(tǒng)計(jì)各血清型的數(shù)量）。繪制兩種血清型菌株在單獨(dú)染毒和混合染毒時(shí)從動(dòng)物體內(nèi)清除的曲線，觀察清除過程是否有變化，以判斷體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中是否存在O:3、O:9血清型菌株相互抑制現(xiàn)象;3.采用懸液芯片技

4、術(shù)對(duì)每隔3小時(shí)處死的各組小鼠（0小時(shí)用未注射小鼠，即陰性對(duì)照表示）血清檢測(cè)包括白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子等23種細(xì)胞因子水平，繪制動(dòng)態(tài)曲線，判斷O:3與O:9染毒在細(xì)胞因子水平上是否存在一定差異。
　　結(jié)果：1.體外培養(yǎng):單獨(dú)培養(yǎng)和混合培養(yǎng)下的O:3、O:9兩種血清型菌株的生長(zhǎng)情況不同或不全相同（F=11.449，P＜0.001），從生長(zhǎng)的菌量上看，單獨(dú)培養(yǎng)和混合培養(yǎng)時(shí)的O:3均比相同條件下的O:9低(P＜0.001)?；旌?/p>

5、培養(yǎng)組在27-48小時(shí)階段，O:3與O:9的菌量之比明顯低于單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的O:3/O:9(t=4.159， P＜0.01)。從生長(zhǎng)速率上看，單獨(dú)培養(yǎng)和混合培養(yǎng)條件下的O:3、O:9無差異(F=0.051，P=0.985)。2.動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的O:3呈現(xiàn)規(guī)律的清除曲線，表現(xiàn)為逐漸減少的趨勢(shì)。而O:9走勢(shì)壓低，一直“匍匐”在橫坐標(biāo)上方。O:3單獨(dú)染毒、O:9單獨(dú)染毒、O:3混合染毒和O:9混合染毒的菌量之間不同或不全相同(F=5.

6、018，P=0.004)，與體外培養(yǎng)不同，單獨(dú)培養(yǎng)和混合培養(yǎng)時(shí)的O:3均比相同條件下的O:9的菌量高(P＜0.05)?；旌先径緯r(shí)在27-48小時(shí)階段中O:3與O:9的菌量之比明顯低于單獨(dú)染毒時(shí)的O:3/O:9(t=2.698，P=0.023)。單獨(dú)感染和混合染毒條件下的O:3、O:9從小鼠體內(nèi)清除速率總體之間無差異(F=0.231，P=0.874)。3.細(xì)胞因子測(cè)定:O:3染毒組和混合組中eotaxin、TNF-α、GM-CSF和IL-

7、10等細(xì)胞因子的含量存在差異;在不同時(shí)段上，O:9染毒組和混合組中IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-5、IL-6、GM-CSF、IL-10和IFN-γ等細(xì)胞因子的含量上有差異，IL-1β、IL-2等十種促炎細(xì)胞因子，IL-10、IL-13、IL-17、G-CSF、GM-CSF等五種抑炎細(xì)胞因子的含量變化表明O:3、O:9之間存在交互作用，在IL-5、IL-13兩個(gè)因子上表現(xiàn)為協(xié)同作用，其余為拮抗作用。
　　結(jié)論：小腸結(jié)腸炎

8、耶爾森菌O:3和O:9之間的競(jìng)爭(zhēng)抑制表現(xiàn)為:體外培養(yǎng)中O:9的生長(zhǎng)量高于O:3，混合后O:9抑制了O:3的生長(zhǎng)。體內(nèi)染毒實(shí)驗(yàn)提示，O:3生長(zhǎng)能力反較O:9強(qiáng)，在27-48小時(shí)階段，表現(xiàn)為O:3更易被清除。O:3與O:9感染后，細(xì)胞因子表現(xiàn)各有不同。主要是一方面通過促進(jìn)促炎因子eotaxin、IL-5、RANTES和抑制抑炎因子IL-10、GM-CSF、IL-17α促進(jìn)炎癥的發(fā)生，表現(xiàn)為初期很快清除細(xì)菌，減少細(xì)菌對(duì)小鼠的進(jìn)一步傷害。另一方