創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肝臟RECK-MMP-TIMP變化及抗菌藥物干預效應.pdf

1、目的：探討創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肝組織RECK-MMP-TIMP基因表達水平變化及抗菌藥物頭孢哌酮鈉聯(lián)用乳酸左旋氧氟沙星對其的干預效應. 方法：1.雄性SD大鼠1lO只,隨機分11組,每組10只,第1組:正常對照組(NC組);第2～6組:創(chuàng)傷弧菌膿毒癥組(VV組),予雙后肢皮下注射創(chuàng)傷弧菌(濃度為9×108cfu/m1,劑量為lml/1000g),構(gòu)建創(chuàng)傷弧菌膿毒癥模型.該組大鼠分別在注射VV后2h、6h、9h、12h、16h時活殺

2、.第7～11組:創(chuàng)傷弧菌膿毒癥聯(lián)用抗菌藥物干預組(AA組),予雙后肢皮下注射創(chuàng)傷弧菌(濃度、劑量同上),從注射VV后6h起,予腹腔注射(ip)頭孢哌酮鈉(180mg/kg)和乳酸左氧氟沙星(18mg/kg),每日2次,分別在注射VV后9h、12h、16h、36h、2周時活殺.取部分肝臟組織于液氮中保存,后-70℃保存. 2.采用Trizol試劑提取各組大鼠肝組織總RNA,紫外分光光度計測定RNA濃度,以總RNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄成c

3、DNA.然后以cDNA為模板,以大鼠RECK、MMP2、MMP9、TIMP2引物進行PCR擴增反應.擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳,電泳結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)成像,QLlanity One分析軟件進行分析,以(目的基因/β-actin)為該基因表達的相對值. 3.計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)表示,應用SPSS12.0進行t檢驗、方差分析等處理.P<0.05為差異有顯著性意義. 結(jié)果：1.正常大鼠肝組織MMP-2基因mRNA

4、表達量較低,VV組染菌后早期2h、6h和9h肝組織MMP-2基因mRNA水平表達明顯上調(diào)(P<0.05),12h、16h表達雖上調(diào),但與NC組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05).AA組在染菌后6h、9h 12h、16h、36h、2周的MMP-2 mRNA表達量表達量逐漸下降,與NC組相比均無明顯差異(P>0.05).AA組與相同時間點VV組相比,AA組在染菌后9h的肝組織MMP-2基因mRNA水平表達明顯下調(diào)(P<0.05). 2

5、.正常大鼠肝組織MMP-9基因mRNA表達量較低,VV組染菌后2h、6h和9h肝組織MMF-9基因mRNA水平表達明顯上調(diào)(P<0.01),晚期12h、16h表達亦上調(diào)(P<0.05),但較早期表達有所下調(diào)(與9h組比較,P<0.05).AA組染菌后9h、12h肝組織MMP-9基因mRNA表達量仍明顯高于NC組(P<0.01),其后該表達量逐漸降低,染菌16h、32h和2w的肝組織MMP-9基因mRNA表達量較NC組相比無明顯差異(P>

6、0.05).從組與相同時間點VV組相比,從組在染菌后各時間點的肝組織MMP-9基因mRNA水平表達無明顯變化(P>0.05). 3. 正常大鼠肝組織TIMP-2基因mRNA表達量較高,VV組大鼠染菌后肝組織TIMP-2基因mRNA水平表達呈下降趨勢,但與NC組比較,僅染菌后16h組其表達有所下調(diào)(P<0.05).AA組在染菌后6h、9h 12h、16h、36h、2周的TIMP-2mRNA表達量有所上調(diào),與NC組相比均無明顯差異(

7、P>0.05).AA組與相同時間點VV組相比,從組在染菌后9h、12h和16h組的肝組織TIMP-2基因mRNA水平表達量明顯上調(diào)(P<0.05). 4.正常大鼠肝組織RECK基因mRNA表達量較高,VV組染菌后肝組織RECK基因mRNA水平表達呈下降趨勢,但與對照組比較,無統(tǒng)計學意義(P>0.05).從組在染菌后6h、9h 12h、16h、36h、2周的RECK mRNA表達量有所上調(diào),與NC組相比均無明顯差異(P>0.05)

8、.與相同時間點VV組相比,AA組在染菌后各時間點的肝組織RECK基因mRNA水平表達無明顯變化(P>0.05). 結(jié)論：1.隨創(chuàng)傷弧菌膿毒癥的進展,肝組織MMP-2和MMP-9 mRNA表達水平逐漸增高,至膿毒癥中期(6-9h)達到高峰,后降至正常,TIMP-2 mRNA表達呈逐漸減低趨勢,而RECK mRNA表達水平則無明顯變化. 2.及早使用頭孢哌酮鈉和乳酸左氧氟沙星可有效下調(diào)肝組織MMP-2表達水平,同時明顯上調(diào)肝