苯及同系物暴露與多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶關(guān)系的研究.pdf

1、為進一步探討苯及同系物對職業(yè)暴露人群外周血白細胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase，PARP]等指標的影響，弄清其損傷機制，本次研究做了以下工作。 目的: 1.建立外周血白細胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)活性的測定方法，建立外周血白細胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)假基因多態(tài)及PARP微衛(wèi)星DNA之Promoter(CA)多態(tài)性的檢測方法。 2.探討苯及同系物接

2、觸工人外周血白細胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[PARP]活性。苯及同系物接觸者是否存在多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶活性的差異，包括接觸工齡、接觸者濃度等差異。另外，苯中毒明顯存在女性易感，多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶是否也存在性別差異。 3.探討慢性苯中毒病人多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)假基因多態(tài)分布特點，為尋找苯中毒的易感者提供依據(jù)。 4.檢測苯接觸人群PARP微衛(wèi)星DNA之等位基因Promoter(CA)多態(tài)性，以便下一

3、步研究苯中毒病人與Promoter(CA)多態(tài)性的關(guān)系，為苯中毒易感性研究提供依據(jù)。 方法: 1.用[32P]NAD放射性標記法測定某石化企業(yè)37名接觸苯及同系物的工人外周血白細胞PARP活性。 2.采用酚-氯仿法提取基因組總DNA，核酸蛋白定量儀(DU400)測定OD260及OD280的值，計算DNA濃度及純度。 3.PARP假基因多態(tài)測定，參照Lyn等的方法，并摸索多聚酶鏈反應(PCR)條件，從基因組

4、DNA中擴增PARP假基因片段。引物如下：5’-AAGAAGCCAACATCTGAGCT-3’和5’-TTTCCTTGTCATCCTTCAGC-3’。含溴乙錠的2.1％瓊脂糖電泳。 4.對苯接觸組工人進行PARP微衛(wèi)星DNA之等位基因Promoter(CA)進行檢測。正鏈引物：5’-GATTCCCCATCTCTTTCTTT-3’；負鏈引物：5’-AAATTGTGGTAATGACTGCA-3’。變性聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染顯色。

5、 結(jié)果: 1.苯及同系物接觸組外周血白細胞PARP活性為835.07pmol/min/μl，高于對照組609.90pmol/min/μl(P＜0.05)；接觸組PARP活性異常率為51.4％，明顯高于對照組10.5％(P＜0.01)；女性工人PARP活性異常率為61.9％，明顯高于男性工人37.5％(P＜0.01)。 2.苯中毒病人外周血淋巴細胞微核率范圍0‰～6‰，中位數(shù)為2‰，對照組外周血淋巴細胞微核率范圍0‰

6、～3‰，中位數(shù)為1‰；苯中毒病人SCE率為(6.31±1.26)次/細胞；對照組SCE率的群體平均值為5.59±0.18次/細胞。苯中毒組與對照組微核率、SCE率存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，苯中毒組和對照組的PARP假基因中B基因頻率分別為0.121和0.116，苯中毒組與對照組PARP假基因多態(tài)分布一致(P＞0.05)。 3.檢測苯接觸人群76名，得到PARP基因微衛(wèi)星DNA中Promoter(CA)四個等位基因分別是28

7、bp，41bp，85bp，93bp，出現(xiàn)頻率分別為96.05％，93.42％，28.95％，36.84％。 討論: 1.本研究結(jié)果可見，苯及同系物接觸組外周血白細胞PARP活性和異常率均明顯高于對照組(P＜0.05)，進一步證實苯及同系物的致毒、致癌作用可能與白細胞中異常高的PARP活性和DNA損傷有關(guān)?？紤]到異常高PARP活性對癌變的指示作用，建議將外周血白細胞PARP活性作為長期低濃度苯及同系物作業(yè)人群的健康監(jiān)護指標

8、之一，在職業(yè)健康體檢中與血常規(guī)同時進行檢測。研究結(jié)果表明女性工人PARP活性異常率高于男性工人，可能與女性對苯的易感性較男性高有關(guān)。 2.本次研究證明苯中毒病人中微核率及SCE率的增高，表明苯中毒導致DNA的損傷肯定。我們的研究未發(fā)現(xiàn)苯中毒與PARP假基因多態(tài)性及B基因頻率增高有統(tǒng)計學差異，未發(fā)現(xiàn)苯中毒病人PARP酶的假基因多態(tài)存在差異。慢性苯中毒可引起微核率、SCE的增高，未發(fā)現(xiàn)PARP假基因多態(tài)與慢性苯中毒有關(guān)聯(lián)，我們將進一

9、步增加檢測苯中毒病人PARP酶活性及增大苯中毒病人PARP酶假基因多態(tài)檢測例數(shù)，以便進一步探討苯中毒與PARP酶假基因多態(tài)的關(guān)系。 3.收集了苯接觸人群76名，得到PARP基因微衛(wèi)星DNA之Promoter(CA)四個等位基因，它們的大小分別為28bp，41bp，85bp，93bp，出現(xiàn)頻率分別為96.05％，93.42％，28.95％，36.84％。由于苯中毒事故的偶然性，我們還未能收集到足夠的苯中毒病人的DNA樣本，所以我們

10、未能對苯中毒病人組進行CA等位基因的檢測，對苯中毒病人中是否出現(xiàn)Promoter(CA)等位基因頻率的差異有待進一步的研究。 結(jié)論: 1.苯及同系物暴露者ALP、NSE及MBP均增高。 2.苯及同系物暴露者外周血白細胞PARP活性和異常率均增高，且女性高于男性。 3.苯中毒病人PARP假基因多態(tài)性及B基因頻率未見異常分布。 4.苯及同系物暴露者PARP基因微衛(wèi)星DNA之Promoter(CA)有四