多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1)抑制劑對熱暴露介導的大鼠小腸上皮緊密連接屏障損害的保護性作用.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定的熱暴露大鼠模型，觀察多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制劑(pj34)是否影響熱暴露大鼠腸上皮緊密連接屏障通透性，并通過觀察腸上皮細胞緊密連接蛋白表達的變化，初步探討pj34對腸上皮屏障通透性影響的機制。
　　 方法：將麻醉SD大鼠放置在環(huán)境溫度恒定(42℃)通風的恒溫箱中，利用溫度計每10min測量一次肛溫，建立穩(wěn)定的熱暴露模型，熱暴露程度將24h死亡率控制在10-20％左右。先期預(yù)實驗觀察熱暴露結(jié)

2、束后0h，2h，6h，8h，12h，24h大鼠腸道上皮細胞屏障通透性及緊密連接蛋白occludin表達變化，選取變化最顯著的熱暴露結(jié)束后2h為最佳干預(yù)效果觀察點。干預(yù)試驗時，將SD大鼠隨機分為三組(n≥6)：熱暴露前1小時給予pj34的熱暴露組(Intervention組，I組)與安慰劑(生理鹽水)對照的熱暴露組(Vehicle組，V組)及常溫對照組(Normal組，N組)，給予熱暴露。觀察熱暴露結(jié)束2小時后，pj34對大鼠腸上皮細胞屏

3、障通透性的影響(血漿中熒光劑FD4、內(nèi)毒素及炎性細胞因子濃度變化)，并通過光鏡(HE染色)及透射電鏡觀察小腸組織的大體及微觀形態(tài)學改變。應(yīng)用蛋白印跡雜交(Western blot)技術(shù)，檢測熱暴露結(jié)束2小時后，各組腸上皮細胞緊密連接蛋白occludin表達的變化情況。并應(yīng)用免疫熒光、免疫組化檢測occludin蛋白表達的形態(tài)學變化情況。
　　 結(jié)果：預(yù)實驗中，將大鼠麻醉后放入42℃恒溫箱，核心體溫上升速度約0.5℃/5min，熱

4、暴露50min的大鼠24h死亡率在16％，50min時肛溫可達42℃左右。在6個觀察時間點中，熱暴露結(jié)束后2h內(nèi)毒素水平最高(P<0.05)，緊密連接蛋白Occludin表達最低，因此該時間點熱暴露的損傷作用達到最強，并選為干預(yù)效果觀察點。干預(yù)試驗中，熱暴露結(jié)束后2h，給予生理鹽水的熱暴露大鼠小腸上皮細胞屏障通透性(FD4、內(nèi)毒素及細胞因子水平)顯著高于正常對照組(p<0.05)，而pj34干預(yù)組的血漿熒光劑FD4濃度顯著低于安慰劑熱暴

5、露組(P<0.05)，兩組間內(nèi)毒素及炎性因子水平也具有顯著差異(P<0.05)。形態(tài)學方面，光鏡觀察空腸HE染色，與正常大鼠比較，安慰劑組及干預(yù)組均出現(xiàn)腸上皮細胞從微絨毛頂端滑塌，從多個鏡下視野觀察(≥6個視野/片)，此種表現(xiàn)不具有普遍性，但干預(yù)組上皮細胞脫落程度明顯減輕。透射電鏡下，正常大鼠腸上皮細胞，緊密連接結(jié)構(gòu)完整，呈致密的帶狀結(jié)構(gòu)。熱暴露結(jié)束2h后，安慰劑組緊密連接斷裂，細胞間隙增寬，致密度減輕。干預(yù)組緊密連接帶狀結(jié)構(gòu)完整，致密