血管平滑肌CMC-LC-MS-MS聯(lián)用法篩選中藥活性成分.pdf

1、本文第一章綜述細(xì)胞膜色譜法(CMC)近幾年的研究現(xiàn)狀及發(fā)展。首先闡述CMC的基本原理和特點(diǎn)；其次介紹CMC在藥學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展，包括中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究、藥物與受體及受體亞型親和作用研究、單體化合物活性篩選及中藥質(zhì)量控制方面的應(yīng)用；最后探討CMC在發(fā)展中所面臨的問題及對(duì)策，并對(duì)其在藥物研究、分析領(lǐng)域等方面的應(yīng)用進(jìn)行了展望。
　　 本文第二章綜述CMC在中藥活性成分分析中的應(yīng)用。首先闡述CMC主要原理和其用于中藥分析的優(yōu)點(diǎn)；其次

2、介紹CMC在中藥活性成分分析中的應(yīng)用進(jìn)展情況；最后探討CMC在中藥活性成分分析中所面臨的問題及對(duì)策，并對(duì)CMC用于中藥活性成分的篩選進(jìn)行了展望。
　　 本文第三章建立血管平滑肌細(xì)胞膜色譜(VSM/CMC)模型。測定血管平滑肌細(xì)胞膜固定相(VSM/CMSP)蛋白含量和Na+、K+-ATP酶活性；用電子顯微鏡和表面能譜技術(shù)分析VSM/CMSP表面特性；用VSM/CMSP色譜柱考察4種二氫吡啶類藥物（苯磺酸氨氯地平、鹽酸尼卡地平、尼群

3、地平和硝苯地平）的保留特性，并用容量因子的對(duì)數(shù)值（logk'）來表示藥物與細(xì)胞膜及膜受體的親合作用強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，由VSM/CMSP構(gòu)成的色譜系統(tǒng)，與傳統(tǒng)的正相和反相色譜系統(tǒng)不同，具有色譜分離與活性識(shí)別的“雙重”特性；四種二氫吡啶類藥物在VSM/CMC模型上的親和性與其藥理作用有顯著相關(guān)性。因此，VSM/CMC模型可用于研究藥物分子與細(xì)胞膜上信息靶點(diǎn)（如，受體）的相互作用，且可以用來篩選復(fù)雜體系中的活性化合物。
　　 本文第

4、四章通過將VSM/CMC與LC-MS/MS聯(lián)用，我們建立了一種從中藥中篩選血管收縮抑制劑的分析方法。采用大鼠胸主動(dòng)脈VSM細(xì)胞制備VSM/CMC柱的固定相；收集VSM/CMC柱上的保留組分，然后在優(yōu)化條件下進(jìn)入LC-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行離線分析。采用尼群地平和硝苯地平作為陽性對(duì)照考察VSM/CMC與LC-MS/MS離線聯(lián)用方法的適用性和可靠性后，將此方法用于篩選北五味子(SCF)和南五味子(SSF)提取物中擴(kuò)張血管的活性成分，兩種藥材中被

5、VSM/CMC所保留的主要組分通過LC-MS/MS鑒定為五味子甲素(DSD)和五味子酯甲(STA)；競爭實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DSD和硝苯地平競爭結(jié)合細(xì)胞膜受體，DSD和STA在VSM細(xì)胞膜上的結(jié)合位點(diǎn)有部分重疊；體外藥理實(shí)驗(yàn)證明，STA和DSD能夠呈劑量依賴性地松弛經(jīng)氯化鉀預(yù)收縮的大鼠胸主動(dòng)脈。我們建立的VSM/CMC-Online-LC-MS/MS分析方法可用于篩選SCF和SSF中的血管收縮抑制劑，這可能有助于從天然產(chǎn)物中開發(fā)血管收縮抑制劑