紅細(xì)胞生成素對(duì)白蛋白誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響及其與TGFβ1-ILK通路的關(guān)系.pdf

1、目的：探討紅細(xì)胞生成素(EPO)對(duì)人白蛋白誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化過(guò)程的影響，以及TGFβ1/ILK信號(hào)通路與此過(guò)程的關(guān)系，尋找EPO延緩腎纖維化作用的可能機(jī)制。
　　 方法將體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞隨機(jī)分組：①空白對(duì)照組：未加任何刺激物；②EPO誘導(dǎo)組：20U/ml EPO；③白蛋白誘導(dǎo)組：5mg/ml白蛋白；④EPO干預(yù)組：不同濃度EPO(5、10、20U/ml)及5mg/ml白蛋白；⑤轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因

2、子β1(TGFβ1)拮抗劑組：TGFβ1受體阻斷劑(SB431542)及5mg/ml白蛋白，以上各組均刺激24h。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞TGFβ1、ILK mRNA的轉(zhuǎn)錄水平：細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的蛋白表達(dá)水平：ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液纖連蛋白(FN)的蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：①RT-PCR結(jié)果表明白蛋白誘導(dǎo)組TGFβ1、ILK mRNA較空白對(duì)照

3、組及EPO誘導(dǎo)組顯著升高(P<0.05)，5、10、20U/ml EPO干預(yù)組TGFβ1、ILK mRNA保護(hù)性下調(diào)(P<0.05)，且隨EPO濃度升高作用更加顯著，TGFβ1拮抗劑組ILKmRNA亦較白蛋白誘導(dǎo)組顯著下降(P<0.05)；②細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示白蛋白誘導(dǎo)組E-cadherin的蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組顯著下降，α-SMA的蛋白表達(dá)顯著上升(P均<0.05)，而在EPO干預(yù)組及TGFβ1拮抗劑組E-cadherin的蛋白表達(dá)

4、較白蛋白誘導(dǎo)組顯著上調(diào)，α-SMA的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P均<0.05)，且與EPO的濃度有關(guān)；③ELISA結(jié)果提示FN的蛋白表達(dá)在EPO干預(yù)組及TGFβ1拮抗劑組較白蛋白誘導(dǎo)組顯著下降(P<0.05)；④Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示白蛋白誘導(dǎo)組及EPO干預(yù)組TGFβ1 mRNA、ILK mRNA表達(dá)的水平呈正相關(guān)(r=0.9，0.895，0.825，0.948，P<0.05)。
　　 結(jié)論：人白蛋白可以通過(guò)上調(diào)體外培養(yǎng)的HK-