紅細胞生成素對白蛋白誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的影響及其與TGFβ1-ILK通路的關(guān)系.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討紅細胞生成素(EPO)對人白蛋白誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細胞(HK-2細胞)間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程的影響,以及TGFβ1/ILK信號通路與此過程的關(guān)系,尋找EPO延緩腎纖維化作用的可能機制。
   方法將體外培養(yǎng)的HK-2細胞隨機分組:①空白對照組:未加任何刺激物;②EPO誘導(dǎo)組:20U/ml EPO;③白蛋白誘導(dǎo)組:5mg/ml白蛋白;④EPO干預(yù)組:不同濃度EPO(5、10、20U/ml)及5mg/ml白蛋白;⑤轉(zhuǎn)化生長因

2、子β1(TGFβ1)拮抗劑組:TGFβ1受體阻斷劑(SB431542)及5mg/ml白蛋白,以上各組均刺激24h。應(yīng)用RT-PCR法檢測細胞TGFβ1、ILK mRNA的轉(zhuǎn)錄水平:細胞免疫熒光法檢測細胞E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的蛋白表達水平:ELISA法檢測細胞上清液纖連蛋白(FN)的蛋白表達水平。
   結(jié)果:①RT-PCR結(jié)果表明白蛋白誘導(dǎo)組TGFβ1、ILK mRNA較空白對照

3、組及EPO誘導(dǎo)組顯著升高(P<0.05),5、10、20U/ml EPO干預(yù)組TGFβ1、ILK mRNA保護性下調(diào)(P<0.05),且隨EPO濃度升高作用更加顯著,TGFβ1拮抗劑組ILKmRNA亦較白蛋白誘導(dǎo)組顯著下降(P<0.05);②細胞免疫熒光結(jié)果顯示白蛋白誘導(dǎo)組E-cadherin的蛋白表達較空白對照組顯著下降,α-SMA的蛋白表達顯著上升(P均<0.05),而在EPO干預(yù)組及TGFβ1拮抗劑組E-cadherin的蛋白表達

4、較白蛋白誘導(dǎo)組顯著上調(diào),α-SMA的蛋白表達顯著下調(diào)(P均<0.05),且與EPO的濃度有關(guān);③ELISA結(jié)果提示FN的蛋白表達在EPO干預(yù)組及TGFβ1拮抗劑組較白蛋白誘導(dǎo)組顯著下降(P<0.05);④Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示白蛋白誘導(dǎo)組及EPO干預(yù)組TGFβ1 mRNA、ILK mRNA表達的水平呈正相關(guān)(r=0.9,0.895,0.825,0.948,P<0.05)。
   結(jié)論:人白蛋白可以通過上調(diào)體外培養(yǎng)的HK-

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