血管緊張素-(1-7)對(duì)低氧誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的：觀察血管緊張素1-7[Ang(1-7)]對(duì)氯化鈷(cobaltous chloride, CoCl2·6H2O,Co)誘導(dǎo)的低氧狀態(tài)下正常大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)轉(zhuǎn)分化的影響并探討其可能的機(jī)制。方法:體外傳代培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞,按2×105/ml濃度接種于六孔板中,并隨機(jī)分為對(duì)照組、Co組、Ang-(1-7)、Co+ Ang-(1-7)組四組,Ang-(1-7)終濃度均為10-6mol/L,Co終濃度為10-4mo

2、l/L。①對(duì)照組:NRK52E培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞,無(wú)任何干預(yù)因素;②Co組:NRK52E培養(yǎng)液中加入氯化鈷;③Ang-(1-7)組:NRK52E培養(yǎng)液中加入血管緊張素-(1-7);④Co+Ang-(1-7)組:NRK52E培養(yǎng)液在氯化鈷基礎(chǔ)上加入血管緊張素-(1-7)。每組分別在試驗(yàn)第1d、3d、6d觀察細(xì)胞爬片,進(jìn)行如下檢測(cè):(1)采用免疫細(xì)胞化學(xué)SABC染色法觀察各組細(xì)胞α-SMA、低氧誘導(dǎo)因子-lα(hypoxia inducible

3、 foctor-lα,HIF-lα)、p-ERK1/2的表達(dá);(2)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞上清液中膠原Ⅰ(ColⅠ)的含量;(3)Western blotting蛋白印跡法檢測(cè)測(cè)定p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:①α-SMA在各組的表達(dá):培養(yǎng)1d、3d、6d后,對(duì)照組未見(jiàn)染色陽(yáng)性細(xì)胞,Ang-(1-7)組與對(duì)照組類似;Co組細(xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)α-SMA表達(dá)也增加,但1d,3d與同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組比較,均無(wú)統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義;6d時(shí)Co組表達(dá)α-SMA顯著高于對(duì)照組(P<0.05);與同時(shí)間點(diǎn)Co組相比,Co+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA表達(dá)明顯降低(P<0.05);培養(yǎng)細(xì)胞1d,3d時(shí),四組細(xì)胞α-SMA相比變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(HIF-lα、ColⅠ、p-ERK1/2與此相同)故后續(xù)研究細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間均為6d;②各組HIF-lα表達(dá)的變化:培養(yǎng)6d后,對(duì)照組未見(jiàn)染色陽(yáng)性的細(xì)胞,Ang-(1-7)組與對(duì)照組類似;Co組細(xì)胞HIF-lα表達(dá)較正常組

5、明顯增多(P<0.05),Co+Ang-(1-7)組 HIF-lα表達(dá)減少明顯(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;③NRK52E細(xì)胞p-ERK1/2的表達(dá):培養(yǎng)6d后,正常組及Ang-(1-7)組均不表達(dá)p-ERK1/2;Co組細(xì)胞 p-ERK1/2表達(dá)明顯上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), Co+Ang-(1-7)組細(xì)胞p-ERK1/2表達(dá)減少明顯(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(2)ELISA檢測(cè)結(jié)果:培養(yǎng)6d后,Ang-

6、(1-7)組與對(duì)照組上清液中ColⅠ的含量無(wú)明顯改變,Co組細(xì)胞上清液中ColⅠ含量升高明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Co+Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中ColⅠ含量減少明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)Western blotting蛋白印跡法檢測(cè)結(jié)果:細(xì)胞培養(yǎng)6d后,與對(duì)照組比較,Ang-(1-7)組p-ERK1/2的表達(dá)無(wú)明顯改變,Co組 p-ERK1/2表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05),與Co組比較,Co+A