人血白蛋白對近端腎小管上皮細(xì)胞ACE2表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景及目的：蛋白尿是腎炎最常見的表現(xiàn)，不僅是病變的一個(gè)指標(biāo)，而且作為一個(gè)獨(dú)立因素參與腎臟的病變進(jìn)程。白蛋白是尿蛋白主要成分，對近端腎小管上皮細(xì)胞有直接損害作用。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin angiotensin system，RAS)在腎臟和心血管疾病中扮演著一個(gè)重要的角色。作為RAS的新成員，ACE2可以對抗平衡ACE而促進(jìn)血管舒張并且有利腎保護(hù)作用。ACE2在腎臟中主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞。蛋白尿患者腎小管上皮細(xì)胞處于高蛋

2、白的環(huán)境中，高濃度白蛋白對腎小管上皮細(xì)胞有激活作用，可能通過減少ACE2的表達(dá)而參與了腎臟疾病的進(jìn)展。我們通過體外實(shí)驗(yàn)研究人血白蛋白對人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(Angiotensin converting enzyme2，ACE2)及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin converting enzyme，ACE)表達(dá)的影響，探討白蛋白或蛋白尿?qū)δI臟損害的機(jī)制。 方法：應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將體外培養(yǎng)至

3、第七代的人近端腎小管上皮細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞亞融合后在無血清培養(yǎng)基中同步化24小時(shí)，然后在不同人血白蛋白濃度環(huán)境(0、1、5、10、15 g/L)培養(yǎng)48小時(shí)。用RT-PCR法檢測HK-2細(xì)胞ACE2和ACE的mRNA表達(dá)情況，用Western blot法檢測HK-2細(xì)胞ACE2和ACE的蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果：正常培養(yǎng)狀態(tài)下HK-2細(xì)胞(空白組)存在ACE2和ACE mRNA和蛋白表達(dá)，加入不同濃度(1 g/L-15 g/L)的人

4、血白蛋白成劑量依賴地抑制HK-2細(xì)胞ACE2 mRNA和蛋白表達(dá)。加入5g/L白蛋白HK-2細(xì)胞ACE2 mRNA和蛋白表達(dá)較空白組顯著降低(P<0.01)。正常培養(yǎng)狀態(tài)下HK-2細(xì)胞(空白組)ACE mRNA和蛋白表達(dá)水平較低，隨著加入白蛋白濃度的增加其表達(dá)成劑量依賴提高。加入10g/L白蛋白HK-2細(xì)胞ACE mRNA和蛋白表達(dá)較空白組顯著升高(P<0.05)。 結(jié)論：在體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞存在ACE及ACE2 mRNA和