新型PKC同工酶在人近端腎小管上皮細胞的表達譜及尿蛋白對其表達的影響.pdf

1、目的：
　　 腎間質(zhì)纖維化是幾乎所有慢性腎臟疾病進展到終末期腎功能衰竭的共同通路。腎小管-間質(zhì)的損害與腎功能毀損密切相關(guān)。作為構(gòu)成腎小管間質(zhì)結(jié)構(gòu)的主要細胞之一,腎小管上皮細胞不僅是疾病進展中的受損者,而且是間質(zhì)炎癥、纖維化的積極參與者,在小管間質(zhì)病變進展過程中起重要作用。眾所周知,包括尿蛋白在內(nèi)的多種致病因子對腎小管上皮細胞的損傷大多是通過細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的,而蛋白激酶C(PKC)是細胞信號傳導(dǎo)通路中極其重要的環(huán)節(jié)之一。本

2、研究從細胞信號傳導(dǎo)通路入手,通過檢測正常培養(yǎng)及受不同濃度尿蛋白刺激損傷的HK-2細胞新型蛋白激酶C同工酶(nPKCs)的表達譜,篩選出受尿蛋白刺激而損傷的HK-2細胞表達或上調(diào)表達的nPKCs,為進一步明確其在此損傷過程中的作用,以及尋找一種可通過調(diào)節(jié)nPKCs表達和活化而延緩尿蛋白所致腎小管上皮細胞損傷的新的治療方法提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用硫酸銨沉淀法提取原發(fā)性腎病綜合征(局灶節(jié)段性腎小球硬化型)患

3、者尿液中的總蛋白成分;
　　 2.以人近端腎小管上皮細胞株(HK-2細胞)作為研究對象;分別以不同濃度的尿蛋白(0 mg/ml,1 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml,8mg/ml)處理體外培養(yǎng)的HK-2細胞24h和48h;
　　 3.應(yīng)用免疫細胞化學(xué)技術(shù)(ICC)檢測正常對照及受不同濃度尿蛋白刺激后的HK-2細胞PKC-δ、PKC-η、PKC-θ、PKC-ε及PKC-μ表達情況;
　　 4.應(yīng)用SPSS

4、16.0統(tǒng)計軟件進行結(jié)果統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.所提取尿蛋白的主要成分為白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和IgG等,分別占72.1％、17.9%和9.5%,其它占0.5%;
　　 2.PKC-θ在正常對照組及尿蛋白刺激組HK-2細胞均表達,表達部位主要在胞漿。ICC半定量分析結(jié)果顯示,尿蛋白刺激24h后,1mg/ml尿蛋白刺激組HK-2細胞PKC-θ表達量較正常對照組增高(P＜0.01),其余各組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義(

5、P＞0.05);尿蛋白刺激48h后,各濃度尿蛋白刺激組PKC-θ表達量較正常培養(yǎng)組明顯增高(P＜0.01):
　　 3.PKC-δ在正常對照組及尿蛋白刺激組HK-2細胞均表達,表達部位主要在胞漿。ICC半定量分析結(jié)果顯示,尿蛋白刺激24h后,8mg/ml尿蛋白刺激組HK-2細胞PKC-δ表達量較1mg/ml,4mg/ml尿蛋白刺激組增高(P＜0.05),而其余各組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。尿蛋白刺激48h后,2 mg/

6、ml,4 mg/ml,8mg/ml尿蛋白刺激組PKC-δ的表達量較正常對照組增高(P＜0.01);
　　 4.PKC-ε在正常組及尿蛋白刺激組HK-2細胞胞漿廣泛表達。ICC半定量分析結(jié)果顯示,尿蛋白刺激24h和48h后,各尿蛋白刺激組與正常對照組PKC-ε表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);
　　 5.PKC-η在正常對照組及尿蛋白刺激組HK-2細胞均呈低水平表達,表達部位主要在胞漿。ICC半定量分析結(jié)果顯示,尿蛋

7、白刺激24h和48h后,各尿蛋白刺激組與正常對照組PKC-η表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);
　　 6.PKC-μ在正常對照組及尿蛋白刺激組HK-2細胞均有表達,表達部位主要在胞漿。ICC半定量分析結(jié)果顯示,尿蛋白刺激24h后,尿蛋白刺激組與正常培養(yǎng)組各組間PKC-μ表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。尿蛋白刺激48h后,各尿蛋白刺激組PKC-μ表達量較正常對照組增高(P＜0.01),而其余各濃度尿蛋白刺激組組間差別

8、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 PKC同工酶δ、η、θ、ε、μ在正常對照及受不同濃度尿蛋白刺激而損傷的HK-2細胞均有表達,表達情況有所不同。尿蛋白可明顯上調(diào)PKC-δ,μ,θ的表達。初步推測PKC-δ、PKC-μ、PKC-θ可能參與了尿蛋白所介導(dǎo)的腎小管上皮細胞損傷。因此,進一步研究PKC-μ、KC-δ、PKC-θ參與尿蛋白介導(dǎo)的腎小管上皮細胞損傷的具體機制,對尋找一種干預(yù)其表達和活化而延緩尿蛋白所