基于TPGS-b-PBAE共聚物的pH敏感納米載藥系統(tǒng)逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的研究.pdf

1、惡性腫瘤是嚴(yán)重危害我國人民生命健康的重大疾病，多藥耐藥（Multidrug resistance，MDR）是癌癥臨床治療失敗的主要原因之一。細(xì)胞膜上高表達(dá)的P-糖蛋白（P-gp）是腫瘤產(chǎn)生多藥耐藥性的一個(gè)重要原因，導(dǎo)致單一的抗腫瘤化療效果較差?；诩{米技術(shù)的藥物輸送系統(tǒng)可以將抗腫瘤藥物主動(dòng)靶向輸送到腫瘤部位，從而提高腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性，為逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥提供了新思路。
　　基于以上問題和思路，本項(xiàng)目設(shè)計(jì)出了一種能實(shí)現(xiàn)P-gp抑

2、制和藥物快速釋放的新型pH敏感納米給藥系統(tǒng)，用于化療藥的輸送。研究內(nèi)容主要包括以下三個(gè)部分。
　　第一部分，TPGS-b-PBAE共聚物的合成與表征
　　目的：合成新型pH敏感材料TP接枝聚合物，為下一步做納米制劑打下基礎(chǔ)。
　　方法：本論文通過丙烯酰氯的酰氯基與TPGS上的羥基發(fā)生反應(yīng)，使親水性TPGS可以通過邁克爾加成反應(yīng)，成功的連接于疏水性的PBAE。產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)采用核磁共振氫譜（1HNMR）、紅外光譜（FTI

3、R）進(jìn)行表征分析。
　　結(jié)論：核磁共振氫譜、紅外光譜證明TPGS成功接枝偶聯(lián)到PBAE上。此法反應(yīng)路線簡(jiǎn)單、條件溫和、純化方法簡(jiǎn)單，為下一步納米粒的形成創(chuàng)造出有利條件。
　　第二部分，TPGS-b-PBAE納米粒的制備及其理化性質(zhì)的考察
　　目的：初步評(píng)價(jià)TP納米粒包載和運(yùn)輸化療藥物的潛在價(jià)值，探索該納米粒的pH敏感響應(yīng)特性。
　　方法：本論文采用超聲乳化/溶劑揮發(fā)法制備納米粒，通過單因素考察探索出制備納米粒的最

4、優(yōu)條件。通過體外不同pH介質(zhì)中粒徑變化和釋放藥量的變化探討該納米粒的pH敏感響應(yīng)特性。
　　結(jié)論：合成的高聚物通過超聲乳化法制備得包載Docetaxel(DTX)的納米粒，該納米粒在SEM下呈現(xiàn)圓形或橢圓形的形態(tài)，均一完整，平均粒徑在范圍在200～300nm之間，分布較窄，且粒徑隨接枝度的增加而減小。體外釋放表明納米粒具有明顯的pH敏感特性。為下一步消滅腫瘤細(xì)胞的提供了理論支持和基礎(chǔ)。
　　第三部分，TPGS-b-PBAE納

5、米粒的體外細(xì)胞評(píng)價(jià)
　　目的：初步評(píng)價(jià)TP納米粒逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的潛在價(jià)值，探索該納米?？朔[瘤耐藥的機(jī)制。
　　方法：本論文利用激光共聚焦進(jìn)行直觀定性觀察，探索細(xì)胞對(duì)不同載藥納米粒的攝取與轉(zhuǎn)運(yùn)情況。利用MTT法測(cè)定納米粒對(duì)乳腺癌細(xì)胞的毒性。通過細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期2個(gè)方面初步對(duì)載藥納米粒逆轉(zhuǎn)A2780/T耐藥細(xì)胞多藥耐藥的機(jī)理進(jìn)行研究。通過Western blot，ATP水平，羅丹明潴留實(shí)驗(yàn)，研究TPGS對(duì)A2780/T中過

6、量表達(dá)的P-gp的影響。
　　結(jié)論：MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相對(duì)于陽性對(duì)照DTX，載藥納米粒都呈現(xiàn)更明顯的細(xì)胞生長抑制作用。而耐藥細(xì)胞的IC50值更是僅為DTX的1％。耐藥作用機(jī)制研究表明該pH敏感納米粒可顯著誘導(dǎo)細(xì)胞早期凋亡，增加細(xì)胞在G2/M期的滯留。羅丹明123潴留、ATP水平和Westernblot實(shí)驗(yàn)證實(shí)了聚合物中的側(cè)鏈TPGS下調(diào)ATP水平，抑制P-gp的外排功能，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)了腫瘤的多藥耐藥。因此，基于TPGS-b-PBAE的

7、pH敏感納米粒是值得進(jìn)行深入系統(tǒng)研究的新型抗腫瘤控釋體系。
　　本論文創(chuàng)新點(diǎn)：針對(duì)目前單一的抗腫瘤化療效果較差的問題，提出構(gòu)建具有P-gp抑制功能的pH敏感高分子載體系統(tǒng)，從而同步實(shí)現(xiàn)P-gp的抑制和藥物快速釋放，達(dá)到提高抗腫瘤化療效果的目的。所構(gòu)建的新型高分子載藥膠束具有以下特征：在胞外，TPGS作為水合層起到穩(wěn)定膠束、實(shí)現(xiàn)體內(nèi)長循環(huán)；在胞內(nèi)，TPGS通過還原響應(yīng)分離，與P-gp結(jié)合，抑制藥物的外排，該過程與PBAE在內(nèi)涵體中通