腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌F4ac菌毛蛋白FaeG亞單位的原核表達(dá)及免疫學(xué)鑒定.pdf

1、目的
　　 克隆并表達(dá)腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌(ETEC)F4ac菌毛蛋白亞單位FaeG,鑒定其抗原性和免疫原性,為制備預(yù)防幼畜ETEC感染的疫苗奠定基礎(chǔ)。
　　 方法
　　 以ETEC(C83902)基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增faeG基因,插入原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-6P-1,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-faeG。將pGEX-faeG轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL-21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE分析表達(dá)蛋白的相對分子質(zhì)量和

2、表達(dá)形式,Western blot鑒定其抗原性。將表達(dá)菌超聲破碎后離心提取包涵體制備抗原,經(jīng)口灌喂免疫小鼠,檢測小鼠血清中抗FaeG的IgG、IgA,糞便IgA和腸粘液IgA,鑒定其免疫原性。重組蛋白FaeG口服免疫小鼠,進(jìn)行動物免疫保護(hù)實驗。
　　 結(jié)果
　　 擴(kuò)增的faeG基因全長786bp,與基因文庫中的faeG基因同源性達(dá)96％。重組質(zhì)粒pGEX-faeG經(jīng)PCR及雙酶切鑒定確有插入片段,且序列完整。表達(dá)產(chǎn)物Fa

3、eG相對分子質(zhì)量約53KD,主要存在于碎菌后的沉淀中,以包涵體形式表達(dá)。Western blot顯示該蛋白可與ETECF4ac陽性血清特異性結(jié)合,免疫后小鼠體內(nèi)抗FaeG IgG、IgA明顯高于PBS對照組和GST對照組。免疫小鼠至少能抵抗1MLD的大腸埃希菌強(qiáng)毒株C83902的攻擊。
　　 結(jié)論
　　 成功構(gòu)建了ETEC F4ac菌毛蛋白亞單位FaeG的重組質(zhì)粒pGEX-faeG,表達(dá)了重組蛋白FaeG,該蛋白具有良好